Лабораторный практикум по дисциплине Основы токсикологии ОПД.Ф.09

Министерство образования и науки РФ Восточно-Сибирский государственный технологический университет

Составители: д.в.н., проф. Сперанский В.В, к.т.н. Бубеева Н.Б., к.б.н. Мангутова Е.В.

Лабораторный практикум по дисциплине Основы токсикологии ОПД.Ф.09 для студентов специальности 320700 “Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов” со специализацией “Защита окружающей среды”

Составители: д.в.н., проф. Сперанский В.В к.т.н. Бубеева Н.Б. к.б.н. Мангутова Е.В.

Улан-Удэ, 2004

Лабораторный практикум по дисциплине Основы токсикологии ОПД. Ф.09 для студентов специальности 320700 “Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов” со специализацией “Защита окружающей среды”. – Улан-Удэ: Изд-во ВСГТУ, 2004. – 22 с.

В лабораторный практикум вошли семь лабораторных работ, рассчитанных на 20 аудиторных часов. В практикуме рассмотрены основные загрязнители и токсичные вещества, используемые человеком в промышленности, сельском хозяйстве и быту.

Ключевые слова: токсикология, токсичные ксенобиотики, пестициды, отравление, интоксикация

вещества,

 Издательство ВСГТУ, 2004

ВВЕДЕНИЕ СОДЕРЖАНИЕ стр. 1. ВВЕДЕНИЕ

4

2. Правила оформления лабораторных работ

5

3. Оценка токсичности методом биотестирования

6

4. Определение химического состава сточных вод

8

5. Вопросы для самоконтроля

10

6. Определение хлорсодержащих соединений

11

7. Определение хлорофоса в воде и кормах методом

14

хроматографирования в тонком слое 8. Вопросы для самопроверки

17

9. Обнаружение и идентификация афлатоксинов

18

10. Токсикология фосфорорганических пестицидов

20

11. Качественная реакция на определение наличия ДДТ

21

в пищевых продуктах 12. Возможные темы рефератов для выполнения

23

самостоятельной работы студентов 13. Рекомендуемая литература

25

Курс “Основы токсикологии” относится к циклу общепрофессиональных дисциплин для специальности “Основы охраны окружающей среды”. Токсикология (от греч. toxicon - яд и 1оgos - учение) - наука, изучающая яды и их действие на организм человека и окружающую среду. Она принадлежит к числу наук, характеризующихся исключительно высокими темпами накопления фактического материала, что связано с все возрастающим количеством новых химических соединений, потенциально опасных для человека. На современном этапе забота о сохранении природы заключается не только в разработке и соблюдении Законодательств об охране Земли, животного и растительного мира и т.д., но и в познании закономерностей причинноследственных связей между различными видами человеческой деятельности и изменениями, происходящими в природной среде (влияние загрязняющих веществ на природные химикобиологические процессы, изменения в биологических объектах и в биосфере в целом). Целью проведения лабораторного практикума “Основы токсикологии” является освоение знаний о взаимодействии организма с ядами, изучение основных закономерностей механизма токсического действия, понятие о влиянии загрязняющих веществ на природные химико-биологические процессы, и способы предотвращения загрязнении среды. А так же принципы оценки и нормирования веществ в окружающей среде.

ПРАВИЛА ОФОРМЛЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ Токсикологическое исследование помимо самого анализа обязано включать в себя правильное оформление исследований, а также характеристики методов контроля и загрязняющих веществ, поэтому важным моментом является научить студентов правильно составлять акт о выполненном анализе. Акт химико-токсикологического исследования Акт составляется студентом, выполняющим анализ, и должен отражать следующие моменты исследования. 1. Введение. Указывается когда, кем и что исследовалось. 2. Предварительный осмотр доставленного материала. Подробно описываются объекты исследований: тара, упаковка, надписи, печати, состояние их и характер содержимого. Далее описываются предварительные испытания и биологические исследования. 3. Химическое исследование. Подробно излагаются все операции. Описание должно быть ясным и точным, давая полную картину произведенного исследования. 4. Заключение. В заключении пишут: “На основании вышеописанного следует заключить, что в исследуемых объектах (следует их перечислить) не найдено” и перечисляют вещества, на которые производилось исследование с отрицательными

результатами. Далее перечисляют вещества найденные при исследовании, и приводят количества их (или на весь доставленный объект, или полученные вещества выражают в %). Лабораторная работа №1. Тема: ОЦЕНКА ТОКСИЧНОСТИ ПРОДУКТОВ МЕТОДОМ БИОТЕСТИРОВАНИЯ Цель работы: - Познакомиться с веществами способными оказывать токсический эффект на организм человека; - Познакомиться с видами возможного токсического воздействия на организм - Научиться исследовать продукты на токсичность методом биотестирования - Познакомиться с объектами применяемыми для биотестирования. Принцип метода: Химические соединения, загрязняющие внешнюю среду и продукты питания, способны оказывать на организм специфическое действие, проявляющееся не в период воздействия и не сразу после окончания, а в отдаленные периоды жизни индивидуумов. Эксперименты на теплокровных животных по изучению отдаленных последствий действия химических веществ длятся несколько лет и требуют больших затрат. В качестве тест-объекта для обнаружения токсичных веществ используются одноклеточные животные – инфузории Tetrahimena periformis. На этих организмах разработана ускоренная методика определения токсичных веществ.

Благодаря сочетанию в инфузориях признаков клетки и организма на них можно изучать как клеточные так и организменные реакции на токсическое воздействие. Используемые материалы: - взвесь культуры Tetrahimena periformis; - вода водопроводная (набрать воду в стеклянную колбу, не менее чем за 24 часа до исследований, прокипятить в течение 1 часа на водяной бане, закрыть стерильным тампоном и поставить отстаиваться), использовать верхний слой; - исследуемые продукты; - фарфоровая ступка и пестик; - пенициллиновые флаконы с пробками; - предметные и покровные стекла; - микроскоп; - стеклянные палочки; - бумажные фильтры; - 1 %-ный раствор ацетона; - встряхиватель. Ход работы: 1. Взять навеску исследуемого продукта (5г), тщательно измельчить, поместить в коническую колбу и прилить 5 мл 1%-ного раствора ацетона, встряхивать в течение 15 минут с открытым горлышком. 2. По истечении времени – фильтруют через складчатый фильтр. 3. В пенициллиновый флакон прилить 3 мл заранее прокипяченной воды и 0,5 мл среды с культурой Tetrahimena periformis. Использовать данный флакон как контрольный.

4. 5.

6. 7. 8. 9.

Во второй флакон прилить 3 мл полученного фильтрата и 0,5 мл взвеси культуры инфузорий (опытный флакон). На покровное стекло нанести каплю из флакона с контролем и накрыть покровным стеклом. Рассмотреть при малом увеличении. Подсчитать видимое количество инфузорий и рассмотреть их морфофункциональное состояние. Также поступить с опытным образцом. Провести учет результатов, проделывая пункт 4 и 5, через 15, 30 и 45 минут. Учет результатов проводится по морфофункицональным изменениям Tetrahimena periformis: деформация клеток, поведение (подвижность), гибель клеток и лизис клеток. Сделайте вывод по проделанной работе. Лабораторная работа №2

Тема: ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА СТОЧНЫХ ВОД Цель работы: - Познакомиться с понятиями кислотность и щелочность - Научиться определять основные виды химического загрязнения сточных вод - Познакомиться с методами возможного обеззараживания и очистки сточных вод - Выяснить возможные пути попадания загрязняющих веществ Принцип метода: Определение наличия положительных или отрицательных ионов содержащихся в исследуемой воде посредством титрования с индикаторами. Используемые материалы: - исследуемые образцы сточных вод; - колбы конические на 250 мл;

-

бюретки для титрования на 25 и 50 мл.; раствор едкого натрия 0,1 н.; раствор соляной кислоты 0,1 н.; фенолфталеин, 1 % раствор; смешанный индикатор Таширо;

Титрируемая кислотность. Кислотность сточных вод обусловлена содержанием в них веществ, вступающих в реакцию с сильными щелочами. К ним относятся сильные (соляная, азотная и др.) и слабые (уксусная, сернистая и др.) кислоты, катионы слабых оснований (аммония, железа, алюминия и др.) Ход определения. Исследуемую воду отфильтровывают (50100) помещают в коническую колбу. Затем приливают 1 мл. 1% спиртового раствора фенолфталеина и титруют 0,1н. Раствором едкого натра до неисчезающего розового окрашивания. Рассчитывают кислотность Х (мг-экв / л) по формуле:

(едкий натр, едкое кали и др.) и слабые (аммиак, анилин и т.п.) основания, анионы слабых кислот (НСО3, СО3, Н2РО4 и пр.) анионы гуминовых кислот (НS, S2-). Ход определения. 100 мл профильтрованной сточной воды помещают в коническую колбу, приливают 3-4 капли раствора фенолфталеина и тируют на белом фоне 0,1н. раствором соляной кислоты до исчезновения розовой окраски. Затем прибавляют 5-6 капель смешанного индикатора и продолжат титрование до перехода зеленой окраски в фиолетовую. Рассчитывают щелочность Х (мг-экв/л) по формуле: а* к*1000 Х= ------------------- ; (мг-экв/л), V где: а – количество 0,1н.раствора соляной кислоты, израсходованное на титрование, мл; К -поправочный коэффициент для раствора соляной кислоты; V – объем исследуемой воды, л. Вопросы для самоконтроля

а* к*1000 М Х= ------------------- (мг-экв/л), V где: а – количество 0,1н.раствора едкого натра, израсходованного на титрование, мл; М – молярность раствора едкого натра; К -поправочный коэффициент для раствора едкого натра; V – объем сточной воды, взятый для определения, л. Титрируемая щелочность. Щелочность обусловлена содержанием в сточной воде веществ, вступающих в реакцию с сильными кислотами. К ним относятся сильные

1. Дайте определения яд, токсическое вещество, отравление, токсический эффект. 2. Перечислите виды возможного токсического воздействия на организм. 3. Какие методы исследования токсичности продуктов вам известны? 4. Что такое биотестирование. 5. Дать определение понятиям кислотность и щелочность. Какие еще виды токсичных веществ вы знаете? 6. Перечислите основные виды химического загрязнения сточных вод, пути попадания загрязняющих веществ 7. Перечислите возможные методы обеззараживания и очистки сточных вод.

Лабораторная работа № 3, 4 Тема: ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХЛОРСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ Цель работы: - Научиться определять в различных пробах почв хлорсодержащие соединения, в том числе хлорсодержащие пестициды Принцип метода: Метод основан на извлечении препарата из исследуемой пробы органическим растворителе (нгексан). При помощи качественных реакций устанавливается наличие хлорорганических соединений и их последующее хроматографирование в тонком слое окиси алюминия. Подвижным растворителем служит н-гексан. Пятна определяемых препаратов обнаруживаются после опрыскивания пластинок раствором аммиака и серебра в ацетоне при облучении ультрафиолетовым светом. Количественное определение проводят путем визуального сравнения или путем измерения площадей пятен проб и стандартных растворов. Используемые материалы: - исследуемые образцы почвы; - сито, с диаметром 0,5 – 1 мм.; - колба коническая с притертой пробкой, объемом 250 мл.; - встряхиватель; - фарфоровая чашка; - бумажные фильтры; - медная проволока; - спиртовые горелки; - пробирки; - бумага хроматографическая или пластины “Силуфол”; - камера для хроматографии;

-

хроматоскоп; н-гексан; азотнокислое серебро 1% раствор; стандартные растворы искомых препаратов; проявляющий раствор (раствор аммиака и серебра в ацетоне)

Ход работы: Экстракция хлорорганических соединений из почвы. Для анализа берут среднюю пробу почвы в количестве 50-100 г., предварительно высушенную на воздухе и просеянную через сито диаметром 0,5-1 мм. Навеску почвы вносят в склянку с притертой пробкой и заливают н-гексаном так, чтобы слой почвы был полностью покрыт растворителем. Почву с растворителем энергично встряхивают в течение 30 минут на аппарате встряхивания или вручную, после чего отфильтровывают через бумажный фильтр в фарфоровую чашку диаметром 10 см. Почву промывают 2-3 раза гексаном, собирая весь фильтрат в чашку. Качественная реакция на хлорорганические соединения. 1. Прокалите медную проволоку в пламени горелки, затем погрузите в исследуемый раствор и снова поднесите в пламя. Если пламя окрашивается в зеленый цвет, то это свидетельствует о наличие хлорсодержащих соединений. 2. В пробирку отберите 2 мл исследуемого фильтрата и добавьте 2-3 капли 1 %-ного раствора азотнокислого серебра, если выпадет белый осадок, то это свидетельствует о наличие хлорсодержащих соединений. Количественное определение хлорорганические соединения. Оставшийся фильтрат выпарите на воздухе под вытяжным шкафом досуха. Далее высушенную пробу исследуйте для

идентификации хлорорганических соединений методом тонкослойной хроматографии. Для этого перед началом анализа в высушенную пробу залейте 0,1 – 0,5 мл гексана и растворите высушенный осадок, получая рабочий раствор. Хроматографирование. На хроматографическую бумагу на расстоянии 1,5 см от края, при помощи медицинского шприца или пастеровской пипетки, нанести исследуемую пробу в одну точку, так чтобы диаметр пятна не превышал 1 см. Осадок с чашки с экстрактом 3 раза смыть небольшими (0,2 мл) порциями гексана, которые затем нанести на пластинку в центр первого пятна. Справа и слева от пробы на расстоянии 2 см нанесите стандартные растворы исследуемых препаратов, содержащие 1 и 10 мкг (0,001 и 0,01 мг) препарата. Пластинку с нанесенными растворами поместить в камеру для хроматографирования, на дно которой заранее был налит гексан, за 30 минут до начала хроматографирования. Край пластинки с нанесенными растворами может быть погружен в подвижный растворитель не более чем на 0,5 см. После того как фронт растворителя поднимется на 10 см, пластинку выньте из камеры и оставьте на несколько минут для испарения растворителя. Далее пластинку опрыскивайте проявляющим раствором и в течение 10-15 минут облучите УФ-лучами. Пластинку следует располагать на расстоянии 20 см от источника света. При наличии хлорорганических пестицидов на пластинке проявляются пятна серо-черного цвета. Количественное определение производят путем сравнения размера пятна пробы с размером пятна стандартных растворов.

Расчет результатов анализа производят по формуле: А* 1000 Х= --------------; В где, Х – содержание хлорорганических пестицидов в анализируемой пробе, мг/кг; А – количество пестицида, найденное путем визуального сравнения пробы со стандартными растворами путем измерения площади пятен, мг; В – массы навески, мг. Лабораторная работа № 5, 6 Тема: ОПРЕДЕЛЕНИЕ ХЛОРОФОСА В ВОДЕ И КОРМАХ МЕТОДОМ ХРОМАТОГРАФИРОВАНИЯ В ТОНКОМ СЛОЕ Цель работы: - Познакомиться с видами отравлений и научиться выявлять различные признаки интоксикации организма; - Уметь рассчитывать летальную дозу, среднесмертельную и смертельную дозу токсичного вещества; - Знать основные методы детоксикации организма. Принцип метода: Метод основан на извлечении препарата из пробы водой, и последующем извлечении из воды органическим растворителем, хроматографированый в тонком слое. Используемые материалы: - NaCl; - хлороформ; - Подвижный растворитель н-гексан – ацетон; - 1% резорцин в 10 % КОН. Ход работы: Трава, корм, силос-навеску 20 г., экстрагируют 20 мин. в 100 мл воды, второй раз в 70 мл. воды. Водные растворы объединяют в

делительной воронке, добавляя 1-1,5 г. поваренной соли, экстрагируют три раза хлороформом по 50 мл, дореформенные вытяжки обезвоживают безводным сернокислым натрием фильтруют и выпаривают. Сухой остаток растворяют в 0,2-0,5 мл хлороформа, наносят на пластинку и хроматографируют. Край пластинки с нанесенными растворами должен быть погружен в растворитель бензол не более чем 0,5 см. После того как фронт растворителя поднимается на 10 см., пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут для испарения растворителя. Пластинку вновь помещают в камеру для хроматографирования с подвижным растворителем (смесь гексана с ацетоном 1 : 1 ) и хроматографируют как указана выше. Высушенную пластинку опрыскивают проявляющим реактивом (1 % раствор резорцина в 10% растворе КОН и помещают в сушильный шкаф при Т-100 0С до появления оранжево-красных пятен. КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА МЕТИЛЭТИЛТИОФОС. Проводится как с хлорофосом, но при прибавлении молибдата аммония и азотной кислоты выпадает осадок зеленого цвета, который переходит при нагревании в желтый цвет. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОТРАВЛЕНИЕ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ. (2 мышки, крысы, кролик, кошки) путем парэнтериалъного введения хлорофоса из расчета от 500 до 1000 мг/ кг веса животного в зависимости от вида: кролика - 650 мг/ кг кошкам - 800 мг/ кг крысам -1000 мг/кг. При постановке биологической пробы изучают токсические свойства хлорофоса, клинические признаки и антидотную терапию при отравлениях ФОС (атропинасульфат, фосфалит, ТМБ-4, тропацин, аминазин)

ПОСТАНОВКА БИОПРОБЫ. Опытной мышке и кролику вводится подкожно раствор хлорофоса в летальной дозе. Затем за животным ведут наблюдение, определяют характерные клинические признаки при отравлении ФОС и проводят антидотную терапию атропином из расчета 3 мг/ г веса животного. Обратить внимание на лечебную эффективность атропина, фосфолитиш, тропацина при отравлениях ФОС и отметить их недостаток, как антидотаого препарата. Второй мышке также вводится раствор хлорофоса в летальной дозе, а контрольной - растворитель хлорофоса в этом же объеме, что и опытной. После смерти опытной мышки, вскрыть и просмотреть паталогоанатомические изменения ЦНС и внутренних органов. Результаты органов записать. Ферментный метод определения фосфорорганических пестицидов в патматериале. Реактивы: 1. Основной индикаторно- буферный раствор (р-р №1) 2. Индикаторно-буферный раствор (р-р №2) 3. Индикаторно-буферный раствор ацетилхолина (р-р ЖЗ) 4. Холиноетераза или сыворотка крови лошади. ОПИСАНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ: 20 грамм материала измельчают, заливают равным количеством хлороформа и экстрагируют 1 час периодически перемешивая. Затем пипеткой набирают 1 мл хлороформенного экстракта и переносят в химический стаканчик или пробирку. В контрольный стаканчик (пробирку) вносят 1 мл хлороформа. Оба стаканчика помещают в водяную баню на 3 мин. После этого стаканчик охлаждают до комнатной температуры и вносят в них по 1 мл раствора холинэстераза или сыворотку крови лошади. Содержимое хорошо перемешивают и ставят стаканчики в водяную баню (38-39) на 30 мин. Затем в две пробирки берут по 0,5 мл содержимого стаканчика, прибавляют по 4,5 мл раствора № 3 и отмечают время.

Лабораторная работа № 7, 8

Для приготовления колометр, стандарта в отдельную пробирку вносят 0,5 мл содержимого контрольного стаканчика и 4,5 мл раствора №2. Отмечают время уравнивания цвета в контрольных и опытных пробирках с цветом стандарта. Вопросы для самопроверки 1. Какие вещества называют пестицидами? 2. Классифицируй те пестициды по производственному назначению, по химическому составу, по санитарногигиеническому назначению. 3. Какое воздействие способны оказывать пестициды на организм человека? 4. Какое влияние на организм человека оказывают хлорорганические соединения? 5. Дайте определения понятиям период полураспада, смертельная доза, среднесмертельная доза, порог действия, ПДК. 6. Какие организмы (по способу питания) накапливают наибольшее количество пестицидов. 7. Дайте определения понятиям – депонирование, летальный синтез, коагуляция, выведение токсичных веществ. 8. Дайте определения понятиям антидот, антидотная терапия, детоксикация. 9. Почему в качестве растворителя и подвижной фазы используются органические растворители? 10. Обоснуйте необходимость применения или наоборот запрета применения пестицидов в сельском хозяйстве. 11. На какие органы или системы органов пестициды оказывают действие в первую очередь. Ответ обоснуте.

Тема: ОБНАРУЖЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ АФЛАТОКСИНОВ Среди особо опасных контаминантов пищевых продуктов, встречающихся в естественных условиях, выделяют группу микотоксинов – вторичных метаболитов микроскопических грибов, отличающихся высокой токсичностью, а в ряде случаев обладающих мутагенными, тератогенными и канцерогенными свойствами. Среди микотоксинов своими токсичными и канцерогенными свойствами выделяются афлатоксины, продуцируемые микроскопическими грибами рода Aspergillus. Минздравом России утверждены ПДК для афлатоксинов В1 во всех пищевых продуктах на уровне 5 мкг/кг, а для М1 (в молоке и молочных продуктах) – 0,5 мкг/кг. В основе количественного определения лежит визуальное сравнение интенсивности флуоресценции пятен стандартов афлатоксинов при одномерной ТСХ. Цель работы: - познакомиться с видами отравлений микотоксинами и научиться выявлять различные признаки интоксикации организма. Принцип метода: Метод включает следующие стадии: - экстракцию афлатоксинов из образца смесью ацетон-вода; - очистку экстракта от белков, липидов, пигментов; - очистку, разделение и количественное определение афлатоксинов с помощью ТСХ. -

Используемые материалы: NaCl;

-

хлороформ; Подвижный растворитель н-гексан – ацетон; 1% резорцин в 10 % КОН пластина “Силуфол” для тонкослойной хроматографии.

Ход работы: Определение афлатоксина В1. Экстракция. Пробу продукта измельчите на кофемолке. Возьмите 25 г измельченного продукта в колбу на 250 мл, тщательно перемешайте с 25 мл 10% раствора NaCl. Добавьте 100 мл ацетона и встряхивайте на аппарате в течение 30 минут. Полученную смесь фильтруйте через бумажный фильтр, отберите 50 мл фильтрата. Очистка экстракта. К 50 мл фильтрата добавьте 20 мл 15% раствора уксуснокислого свинца и 30 мл Н2О, перемешайте и оставьте на 10 минут в темном месте. Раствор отфильтруйте и отберите 80 мл фильтрата. Перенесите в делительную воронку, добавьте 40 мл гексана и встряхивайте в течение 12 минут, после разделения слоев, отделите нижний вводноацетоновый слой, а верхний ацетоновый слой отбросьте. К вводно-ацетоновому слою добавьте 30 мл гексана и продейлайте то же самое. Далее экстрагируйте водноацетоновый слой 40 мл хлороформа. После разделения слоев нижний хлороформный слой отделяют, а к верхнему вводно-ацетоновому слою добавьте 30 мл хлороформа и 15 мл ацетона. После встряхивания и разделения слоев нижний хлороформный слой отделите. Объединенные хлороформные экстракты поместите в колбу, добавьте 5 г безводного сернокислого натрия, встряхните и оставьте на 15 минут в томном месте. Раствор фильтруйте через кусок ваты в выпарительную чашку и упаривайте досуха.

Вещество смывают со стенок чашки 100 мкл хлороформа. Полученный раствор используют для определения содержания афлатоксина с помощью ТСХ (смотрите работу №3,4).

Лабораторная работа № 9 Тема: ТОКСИКОЛОГИЯ ФОСФОРОРГАНИЧЕСКИХ ПЕСТИЦИДОВ Цель занятий: - Изучить физические и химические свойства пестицидов и методы определения ФОС и фосфида цинка в корме и патматериале. - Изучить токсикологию препаратов при экспериментальных отравлениях лабораторных животных. Принцип метода: качественная реакция на фосфид цинка основана на его разложении кислотой, в результате чего выделяется газообразный фосфорный водород, восстанавливающий азотнокислое серебро. Бумажка, смоченная азотнокислым серебром, чернеет при появлении блестящего налета металлического серебра. Ход работы: Реакция очень чувствительна и выполняется следующим образом: в пробирку объемом 10-20 мл, помещают 0,5 г. исследуемого материала и в нее опускают 2 фильтровальные бумаги, из которых одна смочена 1 % раствором уксусно-кислого свинца, а другая – азотно-кислым серебром. Бумажки отпускают так, чтобы они не касались одна другой и испытуемого материала. Затем в пробирку наливают 1 -2 мл. серной кислоты и закрывают пробкой. Реактивные бумажки зажимают пробкой в горлышке пробирки. При наличии фосфора в исследуемом материале бумажка, смоченная раствором серебра, быстро темнеет, а смоченная раствором свинца не изменяет цвета.

КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА ХЛОРОФОС. Реакция на присутствие иона фосфорной кислоты проводится следующим образом; в пробирку наливают небольшое количество исследуемого материала прибавляют 10% раствор едкого натра и кипятят 2-3 мин. После охлаждения раствор фильтруют и к фильтрату прибавляют свежеприготовленный раствор молибдата аммония и азотную кислоту. При добавлении к хлорофосу раствора щелочи раствор желтеет, а при нагревании выпадает небольшой хлопьевидный раствор, окрашенный в светложелтый цвет, а после кипячения и охлаждения выпадает желтый осадок. Лабораторная работа № 10 Тема: КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА ОПРЕДЕЛЕНИЕ НАЛИЧИЯ ДДТ В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ Цель занятий: - Изучить физические и химические свойства пестицидов в корме и патматериале. - Изучить токсикологию препаратов при экспериментальных отравлениях лабораторных животных. Принцип метода: Принцип качественной реакции основан на образовании берлинской лазури. Приборы и реактивы: - Индикаторная бумажка на ДЦТ. К 10 мл. 1% водного раствора х.ч. красной кровяной соли добавляют такое же количество 3% раствора нитрата серебра Образовавшийся белый осадок немедленно отфильтровывают и дважды промывают малыми порциями дистиллированной воды. Осадок с фильтра переносят

в химический стакан и приливают такое же количество 25% раствора аммиака, чтобы получилась взвесь. Беззольные фильтровальные бумажки нарезают полосками, смачивают в приготовленной взвеси и высушивают. При этом аммиак улетучивается, а в порах бумаги остается железосинеродистое серебро. Реактивные бумажки можно хранить не более 3 месяцев. - Этиловый спирт. - Стеклянная банка с притертой пробкой. - Электрическая плитка - Водяная баня - Пробирки. Ход работы: 100 г исследуемого зерна помещают в колбу, заливают 100 мл этилового спирта, тщательно перемешивают и оставляют дня экстрагирования на 12-24 часа. Полученный экстракт фильтруют и фильтрат подвергают исследованию. Вносят в пробирку 10 мг гидрокарбоната натрия (Nа2СОз), добавляют несколько капель фильтрата и выпаривают досуха на водяной бане. Дно пробирки обтирают насухо, содержимое ее прокаливают на электроплитке и охлаждают при комнатной температуре. Затем к осадку добавляют 1-3 капли серной кислоты с относительной плотностью 1,84 , индикаторную бумажку смахивают 1%-ным раствором 3-х валентного сернокислого железа Fе2(SO4)3, закрывают ею пробирку и нагревают над плиткой в течение 1-2 мин. При наличии в исследуемом продукте ДДТ на реактивной бумажке появится голубое пятно - берлинская лазурь. При исследовании молока берут 100 мл, пробы, выпаривают досуха и отбирают для анализа навеску в 10 г. Дальнейший ход исследования аналогичен приведенному выше для зерна.

Подписано в печать 1.07.2004 г. Формат 60 × 84 1/16. Усл. п. л. 1,39, уч.- изд. л. 1.0 Тираж 50 экз. Печать операт., бум. писч. Заказ№_________________________________________ Издательство ВСГТУ, г. Улан-Удэ, ул. Ключевская 40 в