Методика гельминтологических исследований позвоночных животных

М И Н И СТ Е РСТ В О О БРА ЗО В А Н И Я РО ССИ Й СК О Й Ф Е Д Е РА Ц И И В О РО Н Е Ж СК И Й ГО СУ Д А РСТ В Е Н Н Ы Й У Н И В Е РСИ Т Е Т

М Е Т ОД И К А Г Е Л Ь М И Н Т ОЛ ОГ И Ч Е С К И Х И С С Л Е Д ОВ А Н И Й П ОЗВ ОН ОЧ Н Ы Х Ж И В ОТ Н Ы Х

У чебно-метод и ческоепособи ед ля студ ентов по специ альности 011600 - Би ологи я

В оронеж 2003

У тверж д ено научно-метод и чески м ф акультета, протокол № 14 от14.05.03

советом

би олого-почвенного

С ост авит ели: Ромаш ов Б.В ., Х и цоваЛ .Н ., Т руф ановаЕ .И ., Ромаш оваН .Б.

У чебно-метод и ческоепособи епод готовлено сотруд ни ками В оронеж ского госуд арственного би осф ерного заповед ни ка и каф ед ры теорети ческой и мед и ци нской зоологи и би олого-почвенного ф акультета В оронеж ского госуд арственного уни верси тета Рекоменд уется д ля студ ентов 2 курсаби олого-почвенного ф акультета

СО Д Е РЖ А Н И Е В вед ени е… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … .. Ц ели и зад ачи … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … . Т ех ни капровед ени я гельми нтологи ческого вскры ти я ж и вотного … … М етод ы окраски и и зготовлени я гельми нтологи чески х препаратов … М етод ы качественного и коли чественного учетагельми нтов … … … … К ратки е свед ени я о наи более часто встречаю щ и х ся гельми нтах мелки х млекопи таю щ и х У сманского бора… … … .… … … … … … … … … Т абли цад ля опред елени я семейств и ви д ов гельми нтов, парази ти рую щ и х умы ш еви д ны х гры зунов … … … … … … … … … … ..… . Т абли цад ля опред елени я семейств и ви д ов гельми нтов, парази ти рую щ и х унасекомояд ны х … … … … … … … … … … … … … … … . Л и тература… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … П ри лож ени е… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … …

4 5 5 12 15 18 19 23 25 26

В В ЕД ЕНИ Е Гельми нты и ли парази ти чески е черви – ш и роко распространенная сред и беспозвоночны х группа ж и вы х органи змов. И зучени ем гельми нтов зани мается гельми нтологи я, которая пред ставляетод и н и з разд елов парази тологи и . В о время учебно-полевой практи ки студ ентов по зоологи и уд еляется сравни тельно мало вни мани я гельми нтам. Т ем не менее они обнаруж и ваю тся практи чески у каж д ого позвоночного ж и вотного, особенно оби таю щ его в при род ны х услови ях . Гельми нты пред ставляю т больш ой теорети чески й и практи чески й и нтерес, и и х и зучени е в курсе мед и ци нской зоологи и является вполне оправд анны м. В о-первы х , би оразнообрази е гельми нтов вели ко, сред и беспозвоночны х ж и вотны х по чи слу ви д ов они уступаю т ли ш ьнасекомы м. Гельми нты относятся к нескольки м ти пам ж и вотного ми ра – плоски м и круглы м червям и акантоцеф алам (скребням), т.е. являю тся пред стави телями больш ой группы зоологи чески х объектов. В о-вторы х , гельми нты и мею т своеобразную экологи ю , при нци пи ально отли чную от экологи и свобод нож и вущ и х органи змов. П арази ти чески е черви относятся к естественны м компонентам при род ны х экоси стем и вы полняю т, с од ной стороны , как парази ты , роль регуляторов чи сленности х озяев, с д ругой – троф и ческую ф ункци ю – во внеш ней сред е яйца и ли чи нки гельми нтов являю тся и сточни ком пи щ и д ля беспозвоночны х и позвоночны х ж и вотны х . В -третьи х , гельми нты и мею т больш ое эпи д еми ологи ческое и эпи зоотологи ческоезначени е, являясьвозбуд и телями разли чны х заболевани й у лю д ей и ж и вотны х . К ак прави ло, многи е знаю т что-то о гельми нтах , и ли «гли стах », как и х часто назы ваю т, но не пред ставляю т, как они вы гляд ят в и сслед уемы х матери алах . Гельми нты относятся к наи более экзоти чны м объектам летней полевой практи ки , невсегд анаблю д аемы м ви зуально наряд ус млекопи таю щ и ми , пти цами , насекомы ми и т.д . Студ енты -би ологи во время учебного процесса в основном сталки ваю тся с ф и кси рованны ми и ли тотальны ми препаратами и з гельми нтов. Д ля студ ентов пред ставляет больш ой и нтереспроцесспои скаи и зучени я гельми нтов какж и вы х органи змов. Д аннoe учебно-метод и ческое пособи е пред усматри вает освоени е студ ентами во время учебно-полевой практи ки метод ов гельми н-тологи чески х и сслед овани й, что является од ни м и з направлени й в лекци онно-практи ческом курсепо программемед и ци нской зоологи и .

Ц Е Л И И ЗА Д А Ч И Ц елями учебно-полевой практи ки в направлени и и зучени я гельми нтов какобъектов мед и ци нской зоологи и являю тся расш и рени еи углублени езнани й о би оразнообрази и парази ти чески х беспозвоночны х , освоени и студ ентами основны х и д оступны х метод ов сбора и и зучени я гельми нтов в полевы х и лабораторны х услови ях . В зад ачи практи ки вх од ят: • освоени е метод ов гель ми нтологи чески х и сслед овани й позвоночны х ж и вотны х , при обретени е навы ков сбора, ф и ксаци и и пред вари тельного опред елени я гельми нтов; • обуч ени е метод и кам окраски и и зготовлени я временны х и постоянны х гельми нтологи чески х препаратов и д альнейш его опред елени я и опи сани я ви д ов гельми нтов; • знак омство с основны ми си стемати чески ми группами гельми нтов (трематод ами , цестод ами и нематод ами ); • знак омство с ф ауной гельми нтов мелки х млекопи таю щ и х и сслед уемой терри тори и ; • освоени еметод ов к ачественного и коли чественного учетагельми нтов; • разви ти е у студ ентов навы к ов научно-и сслед овательской работы и вы полнени е на этой основе и нд и ви д уальны х зад ани й и сслед овательского х арактера. Т Е Х Н И К А П РО В Е Д Е Н И Я ГЕ Л Ь М И Н Т О Л О ГИ Ч Е СК О ГО В СК РЫ Т И Я Ж И В О Т Н О ГО Н аи более уд обны м объектом д ля провед ени я полного гельми нтологи ческого вскры ти я в услови ях полевой практи ки на би останци и В ГУ «В еневи ти ново» являю тся мелки е млекопи таю щ и е: гры зуны и насекомояд ны е. Т уш ки эти х ж и вотны х могут бы ть получены в рамках и сслед овани й по зоологи и позвоночны х . Д ля вы полнени я гельми нтологи ческого вскры ти я необх од и мо и меть опред еленны й набор и нструментов, оборуд овани я и ф и кси рую щ и х ж и д костей, а такж е квали ф и ци рованно прои звод и ть эти кети ровани е и реги страци ю полученны х матери алов. О бору д ован и е и и н ст ру м ен т ари й Н абор оборуд овани я д ля провед ени я полного гельми нтологи ческого вскры ти я зави си т от размеров и сслед уемого ж и вотного. П ри вскры ти и мелки х млекопи таю щ и х д остаточно и меть несколько небольш и х чаш ек П етри (д и аметром 10-11 и 6-7 см.), стеклянны е стаканчи ки объемом 100-150 мл, нож ни цы , вклю чая глазны е, пи нцеты разли чного размера, компрессори й (д ва толсты х стекла размером 22х 5 см, соед и няю щ и х ся меж д у собой ви нтами ), препаровальны е и глы , глазную пи петку, проби рки и ли пузы рьки д ля х ранени я гельми нтов. Д ля сбора мелки х гельми нтов и компрессорного и сслед овани я паренх и матозны х органов и спользую тся опти чески е при боры ти па М БС-9,

М БС-10 с разреш аю щ и м увели чени ем от 4х д о 32х . Д ля провед ени я гельми нтологи чески х вскры ти й потребуется вод а, а такж е заранее при готовленны е ф и кси рую щ и е ж и д кости и полевой ж урнал, необх од и мы й д ля запи си и эти кети ровани я получаемы х в процессе гельми н-тологи чески х и сслед овани й результатов. Ф и ксац и я и реги ст рац и я гельм и н т ов Собранны е гельми нты ф и кси рую тся и реги стри рую тся в соответстви и с при няты ми метод ами . Ф и ксаци я сох раняетпри ж и зненную структуруоргани зма и тканей. В некоторы х случаях ф и ксаци я и зменяет коэф ф и ци ент преломлени я морф ологи чески х структур, д елая более эф ф екти вны м и х д альнейш ее ми кроскопи ческоеи зучени е(Роски н, Л еви нсон, 1957; И ваш ки н и д р., 1971). В качествеф и ксаторов в гельми нтологи ческой практи кенаи болееш и роко при меняю тся эти ловы й спи рт (этанол) и ф ормали н. Ф и ксаци я гельми нтов разли чны х классов осущ ествляется разли чны ми ф и кси рую щ и ми ж и д костями . Д ля ф и ксаци и и х ранени я нематод (круглы е черви ) и спользую т ж и д кость Барбагалло – 3%-ы й раствор ф ормали на на ф и зи ологи ческом растворе. Д ля при готовлени я 1 л этого раствора берут 8 гр. очи щ енной поваренной соли и растворяю т в небольш ом коли честве д и сти лли рованной вод ы (400-500 мл). Затем д обавляю т 30 мл ф ормали на (40% ф ормальдеги д а). П олученную смесь д оли ваю т д и сти лли рованной вод ой д о объема 1 л. Раствор х ранят в банках с плотны ми кры ш ками . Ф и зи ологи чески й раствор в составе ф и кси рую щ ей ж и д кости под д ерж и вает осмоти ческое д авлени е и пред ох раняет круглы х червей отд еф ормаци и . Т рематод , цестод (плоски е черви ) и скребней ф и кси рую т в 70% спи рте. Н и ж е при вод и тся табли ца развед ени я спи ртов д о необх од и мой концентраци и (табл 1). Т абли ца1 Развед ени еспи ртов д о необх од и мой концентраци и Ч тобы получи ть 100 мл спи рта 40° 45° 50° 60° 70° 80° 90°

96° спи рта

вод ы

42 47 52 63 73 83 94

58 53 48 37 27 17 6

Н уж но взятьми лли ли тров 90° 80° спи рта вод ы спи рта вод ы 44 50 56 67 78 89 -

56 50 44 33 22 11 -

50 56 63 75 88 -

50 44 37 25 12 -

70° спи рта

вод ы

57 64 71 86 -

43 36 29 14 -

Д ля сбора и ф и ксаци и гельми нтов и спользую т стеклянны е и ли пластмассовы е проби рки (лучш е небольш и е по размерам, д ли ной 3– 6 см) и ли пузы рьки (д ля эти х целей вполне под х од ят станд артны е пени ци лли новы е пузы рьки ). Д ля ф и ксаци и крупны х гельми нтов и спользую т больш и е по объемам сосуд ы . Гельми нтов, собранны х и з разли чны х органов ж и вотны х -

х озяев, такж е помещ аю т в отд ельную проби рку (пузы рек). П ред почти тельнее каж д ы й ви д гельми нтов и ли во всяком случаечервей од ного класса(трематод , цестод , нематод ) ф и кси роватьв отд ельной проби рке(пузы рьке). К аж д ая проби рка снабж ается эти кеткой, которая пи ш ется просты м каранд аш ом на плотной бумаге. Э ти кетка помещ ается внутрь проби рки (пузы рька). П ри мерны е размеры эти кетки – 3х 1.5 см. Н а од ной стороне эти кетки запи сы вается номер вскры ти я, которы й соответствует запи си в гельми нтологи ческом ж урнале, ви д ж и вотного-х озяи на, его пол и возраст, орган, в котором обнаруж ены гельми нты , ви д и ли болеевы соки й таксон (класс) гельми нта и коли чество собранны х червей. Н а обратной стороне эти кетки указы вается место, д атасборов и ф ами ли я сборщ и ка(ри с. 1). 25. Ры ж ая полевка. ♀ ad. тонки й ки ш ечни к Nematoda – 30 экз.

У смански й бор В еневи ти ново д убрава 10.07.2002 И ванов И .И .

Ри с. 1. Л и цевая и оборотная сторонаэти кетки . Д анны еорезуль татах гель минтологическоговскры тиязаписы ваю тсяв полевой ж урнал (тетрад ь ), гд еуказы вается наиболееполнонеобх од имаяинф ормация. Н иж епривод имф орму таблицы (спримерами), которую мож норасчертитьв ф орматед войного(развернутого) листа тетрад и (рис. 2). В том случае, если и сслед овательпрои звод и твскры ти еотд ельного органа и си стемы органов (неполное гельми нтологи ческое вскры ти е), то соответствую щ ая пометка д елается в 7 и ли послед ней граф е табли цы . Е сли по результатам и сслед овани я ж и вотного гельми нты не обнаруж ены , то об этом такж е в послед ней граф е д елается запи сь («гельми нты не обнаруж ены »). Ч еткость, прави льностьи своевременностьреги страци и в ж урналеполученны х д анны х облегчаети сслед ователю и х д альнейш ую обработку, коли чественны й и качественны й анали з собранны х матери алов. Т ехн и ка провед ен и я гельм и н т ологи ческого вскрыт и я . М етод гельми нтологи чески х вскры ти й и меетнесколько мод и ф и каци й (И ваш ки н и д р., 1971). Н а практи ке рассмотри м д ва ви д а: полное вскры ти е ж и вотного и неполноеи ли ф рагментарноевскры ти е. П олное вскры ти е пред полагает послед овательное и сслед овани е всех органов и тканей ж и вотного и сборвсех обнаруж енны х гельми нтов. Э тотметод сравни тельно труд оемок, но д ает макси мально точны е результаты о зараж енности гельми нтами и сслед ованны х ж и вотны х . П ри ф рагментарном вскры ти и и сслед уется ли ш ьтот и ли и ной орган, си стема органов и ли тканей (напри мер, ж елуд ок и ки ш ечни к, и ли печень, и ли мы ш цы и т.д .). М етод ф рагментарного и сслед овани я при меняю т, как прави ло, д ля пои ска опред еленны х ви д ов гельми нтов. В первую очеред ь, д ля реш ени я конкретны х эпи д еми ологи чески х и эпи зоотологи чески х проблем. Н апри мер, д ля пои ска

возбуд и телей опи сторх оза и сслед уется печень, д ля обнаруж ени я три х и нелл – поперечно-полосатая мускулатураи т.д .

№ Д ата п/п

В и д х озяи наи место д обы чи

25 10.07. Ры ж ая полевка, 2002 В еневи ти ново, д убрава 26 12.07. П олевая мы ш ь, 2002 В еневи ти ново, поймар. У смань 27 12.07. 2002

О бы кновенная бурозубка, В еневи ти ново, ольш ани к

П ол

♂ ♂

В озраст, масса(г)

О рганы , в которы х обнаруж ены гельми нты

ad, 19,5

Т онки й ки ш ечни к П ечень

♀

♀

♀

ad, 27,5

ad, 9,0

К оли чество обнаруж енны х экземпляров гельми нтов по классам Trem. Cest. Nem. Ac. 5 – 30 – –

3

2

–

Т онки й ки ш ечни к Т олсты й ки ш ечни к Ж елуд ок Т онки й ки ш ечни к

17

–

10

–

–

–

25+12

–

– 7

– 52

12 75

– –

П и щ евод М очевой пузы рь

– –

– –

3 10

– –

П ри мечани е. П ри няты есокращ ени я: Trem. – трематод ы , Cest. – цестод ы , Nem. – нематод ы , Ac. – акантоцеф алы .

Ри с. 2. О бразец заполнени я полевого ж урналапо результатам гельми нтологи чески х вскры ти й.

О пред елени е гельми нтов, при мечани е

5 - P. elegans 30 - H. glareoli 3 - M. lineatus (larva) 2 - C. hepatica 17 - P. elegans 10 - Nematoda sp. 25 – G. spumosa 12 – S. agraria C. minuta 7 - Plagiorchis sp. 52 - Cestoda sp. 75 - Nematoda sp. E. oesophagicola C. incrassata

9

В ы ш е мы указы вали , что туш ки мелки х позвоночны х ж и вотны х д ля провед ени я гельми нтологи чески х и сслед овани й во время учебно-полевой практи ки могут бы ть получены в рамках зоологи чески х и сслед овани й по мелки м млекопи таю щ и м, провод и мы х на би останци и В ГУ «В еневи ти ново». В скры ти еж елательно прои звод и тькакмож но бы стреепослеотловаж и вотны х д ави лками (плаш ками Геро). П ри необх од и мости туш ки помещ аю т в х олод и льни к. У насекомояд ны х оченьвы сока акти вностьпи щ евари тельны х ф ерментов, что мож ет при вод и тьк бы строму разруш ени ю (перевари вани ю ) гельми нтов, особенно в теплы е летни е д ни . В связи с эти м вскры ти е д анны х ж и вотны х целесообразно провод и тьне позд нее 1– 1,5 часов после отлова и ли помещ атьи х туш ки в х олод и льни к. П роцессгельми нтологи ческого вскры ти я и меетнесколько этапов: • вск ры ти еж и вотного и вы д елени еорганов; • под готовк а смы вов и соскобов (д ля полостны х органов: ж елуд ка и ки ш ечни ка); • под готовк а органов д ля и сслед овани я в компрессори и (паренх и матозны е органы , мы ш ечная ткань, под кож ная клетчатка, пи щ евод , мочевой пузы рь); • и сслед овани епод би нок уляром компрессори я, и звлечени еи ф и кси ровани е гельми нтов; • и сслед овани е под би нокуляром сод ерж и мого промы ты х органов ж елуд очно-ки ш ечного тракта, и звлечени еи ф и кси ровани егельми нтов; • эти к ети ровани есборов и реги страци я д анны х в полевом ж урнале. П еред началом вскры ти я туш ку мелкого млекопи таю щ его взвеш и ваю т, что необх од и мо д ля более точного опред елени я возраста ж и вотного. Затем туш ку помещ аю т в спи нное полож ени е и с помощ ью глазны х нож ни ц д елаю т по центру разрез брю ш ной и груд ной стенки , вклю чая ш ею (ри с. 3). Разрезаю т осторож но, чтобы не повред и тьвнутренни е органы . В скры ты е брю ш ную и груд ную полости осматри ваю т на нали чи е гельми нтов. О д новременно опред еляю т пол ж и вотного. Д алее и звлекаю т внутренни е органы . В начале отрезаю т пи щ евод в том месте, гд е он при соед и няется кж елуд ку. И звлекаю т ж елуд оки ки ш ечни ки помещ аю т в чаш ки П етри с небольш ой порци ей вод ы отд ельно ж елуд ок, тонки й и толсты й ки ш ечни к. Затем эти органы взрезаю тся нож ни цами , и сод ерж и мое вы пускается в чаш ки П етри . К раем нож ни ц осторож но прои звод ят соскоб сли зи стой. Сод ерж и мое органов и соскоб сли зи стой, и менуемы й п ерви ч ным м а т ри ксом , переносят (смы ваю т вод ой) в стаканы (объемом 100-150 мл), которы е потом наполняю т д оверх у вод ой, перемеш и вая сод ерж и мое. Ч ерез некотороевремя (3-5 ми н) осторож но сли ваю т верх ни й слой ж и д кости (при мерно 1/3 объема). Т аки м образом уд аляется часть взвеш енны х мелки х при месей, а гельми нты д олж ны остаться в осад ке. Затем стаканы вновьнали ваю твод ой и всю процед уру повторяю т. Готовностьсмы ва кпросмотрумож но опред ели тьпо тому, что он станови тся вполнепрозрачны м. П осле промы вани я ж елуд ок и ф рагменты ки ш ечни ка, зах вати в пи нцетом,

10

споласки ваю т и уд аляю т. Д ля органов пи щ еварени я мелки х млекопи таю щ и х д остаточно 2-3-х кратноепромы вани е. Д ля начи наю щ и х и сслед ователей мож но посоветоватьувели чени я чи сла кратности промы вани й эти х органов. След ует отмети ть, что верх ни й слой ж и д кости и з стакана необх од и мо сли вать осторож но, во и збеж ани е перемеш и вани я. Н ельзя сли ватьсли ш ком много ж и д кости и з стакана, таккак легко мож но сли тьтакж ечастьгельми нтов, в первую очеред ьнаи болеемелки е ф ормы . П ромы ты й осад окразли ваю ттонки м (относи тельно прозрачны м) слоем в небольш и е чаш ки П етри и и сслед ую т под би нокуляром при увели чени и 4– 8х . Т ех ни ка просмотра такова: чаш ки П етри помещ аю т на столи кми кроскопа и , перемещ ая послед овательно чаш ку сверх у вни з и слева направо (и ли справа налево), просматри ваю твсесод ерж и мое. О бнаруж енны х гельми нтов и звлекаю т препаровальны ми и глами и ли при помощ и глазной пи петки (мелки еф ормы ) и переносятв проби рки (пузы рьки ) сф и кси рую щ ей ж и д костью . Д ля и сслед овани я остальны х органов и тканей от мелкого млекопи таю щ его и спользую тком п рессорный м ет од. П аренх и матозны еорганы (печень, селезенка, почки , легки е), серд це, мочевой пузы рь, пи щ евод , трах ею , ф рагменты мы ш ечной ткани (массетеры , д и аф рагма), ф рагменты под кож ной клетчатки разд авли ваю т меж д у стеклами компрессори я и просматри ваю т под ми кроскопом. В аж ное услови е при компрессорном и сслед овани и – макси мальная прозрачность и сслед уемы х матери алов. П оэтому органы , в первую очеред ьпаренх и матозны е, и ткани помещ аю т на стекло компрессори я не цели ком, а расчленяю т (разры ваю т) на ф рагменты (пи нцетом и нож ни цами и ли препаровальны ми и глами ) прямо на стекле и равномерно расклад ы ваю т. П ри обнаруж ени и гельми нтов верх нее стекло компрессори я осторож но (под контролем ми кроскопа) под ни маю т, червей и звлекаю ти переносятв проби рки (пузы рьки ) сф и кси рую щ ей ж и д костью . Н еобх од и мо учи ты вать, что гельми нтов, по возмож ности , пред почти тельнее ф и кси ровать, когд а они теряю т акти вность(под ви ж ность). Н еред ко, при и сслед овани и свеж и х матери алов от ж и вотны х -х озяев, парази ти чески е черви и звлекаю тся акти вны ми . О д нако таки е черви , помещ енны ев ф и кси рую щ ую ж и д кость, резко сокращ аю тся, что затруд няети х д альнейш ее морф ологи ческое и зучени е. П оэтому и х вы д ерж и ваю т некоторое время (1-2 часа) в вод опровод ной вод е (трематод и цестод ) и ли ф и зи ологи ческом растворе (нематод ) в чаш ках П етри и ли часовы х стеклах . В том случае, если в и сслед уемы х матери алах обнаруж и ваю тся неакти вны е гельми нты , и х уж емож но помещ атьв ф и кси рую щ и еж и д кости . П о результатам и сслед овани й д елаю т запи сь в ж урнале и помещ аю т соответствую щ ую эти кеткув проби рку(пузы рек).

11

Ри с. 3. Т опограф и я внутренни х органов у мы ш еви д ны х гры зунов (по Н .Н . К арташ еву и д р., 1969). 1 – гортань, 2 – массетеры (ж евательны е мы ш цы ), 3 – трах ея, 4 – пи щ евод , 5 – серд це, 6 – легки е, 7 – д и аф рагма, 8 – печень, 9 – селезенка, 10 – ж елуд ок, 11 – под ж елуд очная ж елеза, 12 – д венад цати перстная ки ш ка, 13 – тонкая ки ш ка, 14 – толстая ки ш ка, 15 – почки , 16 – мочевой пузы рь, 17 – половы еж елезы .

12

П осле заверш ени я сбора гельми нтов проби рки закры ваю т пробками . Х ранят проби рки в гермети чески закры ваю щ и х ся стеклянны х и ли пластмассовы х банках . В ни х проби рки уклад ы ваю тся ряд ами в верти кальном полож ени и . Банку зали ваю т той ж е ф и кси рую щ ей ж и д костью , в которой ф и кси ровали сь сборы . Н а д но банки и меж д у ряд ами проби рок след ует полож и тьслой ваты . П ени ци лли новы е пузы рьки с гельми нтами закры ваю тся рези новы ми пробками , которы е заклеи ваю т пласты рем (и ли скотчем) и ли завязы ваю ткусочком марли , во и збеж ани еи спарени я ф и кси рую щ ей ж и д кости . Э ти пузы рьки мож но х рани тьв специ альны х коробках . М Е Т О Д Ы О К РА СК И И И ЗГО Т О В Л Е Н И Я ГЕ Л Ь М И Н Т О Л О ГИ Ч Е СК И Х П РЕ П А РА Т О В Собранная коллекци я гельми нтов под леж и т и зучени ю – опред елени ю ви д ов, и сслед овани ю и х морф ологи и и т.д . Д ля д остоверного и квали ф и ци рованного опред елени я и д альнейш его морф ологи ческого и сслед овани я и з гельми нтов готовятпрепараты . Т рематод и цестод , какправи ло, окраш и ваю тразли чны ми краси телями и , заклю чая в бальзам, готовят пост оя н н ые препарат ы. Н ематод и скребней помещ аю тв просветляю щ и еж и д кости и готовятврем ен н ые препарат ы. О краш и ван и е гельм и н т ов. В гельми нтологи ческой практи ке в качестве краси телей обы чно при меняю т карми н и гематокси ли н в разли чном при готовлени и (И ваш ки н и д р., 1971). Л учш и м краси телем д ля тотального окраш и вани я плоски х червей (трематод и цестод ) является карми н. Н аи более при мени мой ф ормой карми на является уксусноки сл ый ка рм и н. К раси тель готовят след ую щ и м образом. Н а 100 мл 45% уксусной ки слоты д обавляю т 2 г карми наи д анны й раствор насы щ аю т– ки пятятнамед ленном огнепри мерно 1 час. П ослеки пячени я раствор краски ф и льтруется. Д ля окраски цестод неред ко и спользую т гем а т окси л и н Эрл и ха . Раствор краси теля готовят след ую щ и м образом. Гематокси ли н (2 г) растворяю т в 100 мл эти лового спи рта(96%), д обавляю т100 мл д и сти лли рованной вод ы , 100 мл гли цери на, 3 гкали йны х квасцов и 10 мл уксусной ки слоты . В ремя окраски плоски х червей краси телями , какправи ло, составляет7-20 ми нут, в зави си мости отвели чи ны объекта. О краскучервей лучш епрои звод и ть в часовом стекле. П род олж и тельность окраш и вани я необх од и мо контроли ровать не только по времени , но и ви зуально под би нокуляром, учи ты вая и нтенси вностьпрокраски . Ф и кси рованны х червей перед покраской пред вари тельно промы ваю т в вод еотнескольки х часов д о суток. Е сли окраш и ваю тнеф и кси рованны х червей, то такж е, после и звлечени я и з органов х озяи на, и х отмы ваю т (отмачи ваю т) в вод е в течени е нескольки х часов. Счи таем, учи ты вая собственны й опы т, что лучш е краси ть свеж и х (не ф и кси рованны х ) парази тов. В о всяком случае, качество прокраски вы ш е, в сравнени и сф и кси рованны ми матери алами . При гот овлен и е пост оя н н ых препарат ов. О краш енны х червей, если возни кает необх од и мость, д и ф ф еренци рую т – помещ аю т в соляноки слы й спи рт. Затем червей обезвож и ваю т, просветляю ти заклю чаю тв бальзам. Н и ж е опи саны эти этапы и сх емати чно (ри с. 4) показанапослед овательностьпроцесса и зготовлени я постоянны х препаратов и з плоски х червей.

13

П осле заверш ени я окраски червей споласки ваю т в д и сти лли рованной вод е. Н аэтом этапепод би нокуляром мож но х орош о уви д етьрезультаты . Е сли парази ты оказали сь сли ш ком перекраш енны ми , то их нуж но отд и ф ф еренци ровать, помести в на короткое время в соляноки слы й спи рт (на 100 мл 70% спи ртад обавляю т2-3 капли концентри рованной соляной ки слоты ). Н еобх од и мо учи ты вать, что процесс д и ф ф еренци ровки (уд алени я ли ш него краси теля) протекаетакти вно и бы стро, поэтомуего прои звод ятпод контролем би нокуляра. П осле этого червей споласки ваю т в д и сти лли рованной вод е и обезвож и ваю т, провод я послед овательно по спи ртам возрастаю щ ей крепости (ри с. 4). Замети м, что зачастую д и ф ф еренци ровкунед елаю т, т.к. в д альнейш ем при провод кепо спи ртам слегкаперекраш енны ечерви теряю тчастькраски .

вода

кармин 7-20 мин

80% спирт 7 мин а) (2 раз

вода дистилл. (сп олоснут ь)

90% спирт 7 мин а) (2 раз

70% спирт+ HCl (п од конт ролем м и кроскоп а)

96% спирт 7 мин а) (2 раз

вода дистилл. (сп олоснут ь)

96% спирт

70% спирт 7 мин а) (2 раз

дмф

баль зам

дмф

Ри с. 4. П ослед овательны е этапы окраски (уксусноки слы м карми ном) и при готовлени я постоянны х препаратов плоски х червей (сокращ ени я на сх еме: д мф – д и мети лф талат). О безвож енны х червей просветляю т. Д ля просветлени я мож но и спользоватькси лол, гвозд и чное масло и ли евгенол. В настоящ ее время д ля просветлени я чащ е всего и спользуется д и мети лф талат (Суд ари ков, Ш и ги н, 1965). И з 96% спи рта червей перевод ят в сосуд (бю кс и ли пузы рек), наполненны й д вумя компонентами – 96% спи рт+д и мети лф талат (ри с. 4). П ри этом спи рт, как более легки й, образует верх ни й слой, а д и мети лф талат – ни ж ни й. П омещ енны ев эту«смесь» черви сначала«зави саю т» в 96% спи ртена грани це д вух сред , что ви зуально х орош о заметно, а через некоторое время (в течени е 1-2 часов) постепенно перемещ аю тся в д и мети лф талат. П осле этого червей мож но перенести в чи сты й д и мети лф талат, в котором, по д анны м В .Е . Суд ари кова и А .А . Ш и ги на (1965), они могут х рани ться прод олж и тельное время.

14

Заверш аю щ и м этапом и зготовлени я постоянны х препаратов является заклю чени е червей в «канад ски й» (кед ровы й) бальзам. Н а чи стое пред метное стекло капаю т необх од и мое коли чество бальзама (в зави си мости от вели чи ны объекта), затем в него помещ аю т парази та и накры ваю т покровны м стеклом. П од контролем би нокуляракорректи рую тполож ени ечервя настекле. Готовы е препараты уклад ы ваю т на специ альны е планш еты д ля послед ую щ его вы сы х ани я и отверд ени я бальзама. К ачественно при готовленны й бальзам затверд еваетв течени е2-3 д ней и некри сталли зуется. При гот овлен и е врем ен н ых препарат ов. Само названи е «временны й препарат» под разумевает, что он и зготавли вается наопред еленны й промеж уток времени с целью провед ени я необх од и мы х и сслед овани й. Н ематод , кути кула которы х плох о пропускает краску, а такж е скребней, не окраш и ваю т, а только просветляю т д ля д альнейш его морф олого-таксономи ческого и зучени я под ми кроскопом. С этой целью и зготовляю т временны е препараты . Ч ерви и ли и х ф рагменты помещ аю т на пред метное стекло и заклю чаю т в смесь, составленную и з равны х частей молочной ки слоты , гли цери на и вод ы , соответственно накры вая покровны м стеклом. М елки х нематод мож но помещ ать прямо в гли цери н. Сравни тельно крупны е ф ормы целесообразно заклю чатьв смесьи з равны х частей молочной ки слоты и гли цери на. В смеси гли цери на и молочной ки слоты лучш е всего и зучатьстроени е сколексов (головок) цестод , и мею щ и х важ ноеси стемати ческоезначени е. Н екоторы е и сслед ователи и спользую т д ля и зучени я плоски х червей (трематод ) временны е препараты . В этом случае парази ты заклю чаю тся в смесь, составленную и з равны х частей уксусноки слого карми на, гли цери на и вод ы . Ч ерез несколько д ней препараты мож но и сслед оватьпод ми кроскопом. В ременны е препараты сох раняю тся сравни тельно прод олж и тельное время (д о год а и более). П осле и зучени я препаратов червей снова помещ аю тв и сх од ную ф и кси рую щ ую ж и д кость, в которой они х рани ли сь. М елки х гельми нтов и ли и х ф рагменты , напри мер апи кальны е срезы головны х концов нематод , целесообразно заклю чать в гли цери н-ж елати н. Д анную сред у готовятслед ую щ и м образом: 7 гчи стого ж елати наразмачи ваю т в течени е 2-3 часов в 40 мл д и сти лли рованной вод ы , д обавляю т 50 мл гли цери на и 0,5 г кри сталли ческой карболовой ки слоты . П олученную смесь под огреваю тв вод яной банеи затем ох лаж д аю т. П еред заклю чени ем объектав гли цери н-ж елати н послед ни й под огреваю т на вод яной бане д о ж елеобразной конси стенци и (t – 50-60°). Затем на пред метное стекло помещ аю т объект и на него капаю т несколько капель гли цери н-ж елати на. Д алее накры ваю т покровны м стеклом и под контролем ми кроскопа, пока раствор не засты л, корректи рую трасполож ени еобъекта, перед ви гая при помощ и препаровальны х и гл покровное стекло. Д ля д альнейш его д ли тельного х ранени я, во и збеж ани е вы сы х ани я препарата, покровное стекло снаруж и окантовы ваю т специ альны м лаком. Э т и кет и рован и е и хран ен и е препарат ов. П осле и зготовлени я препаратов (постоянны х и ли временны х ) они д олж ны бы тьэти кети рованы . К ак

15

прави ло, объект зани мает центральную часть пред метного стекла. Соответствую щ и е запи си д елаю т на перед нем и зад нем свобод ны х участках пред метного стекла. Н аод ном и з ни х пи ш ут№ вскры ти я (соответствуетзапи си в гельми нтологи ческом ж урнале), названи е ж и вотного-х озяи на (лучш е лати нское), место и д ату вскры ти я. Н а проти вополож ном конце пред метного стекла пи ш ут лати нское наи меновани е гельми нта и ф ами ли ю его опред ели вш его (ри с. 5). Н ад пи си мож но д елатьтуш ью настекле. Л учш ед елатьнад пи си туш ью на плотной бумаге соответствую щ его размера и затем наклеи ватьна пред метное стекло (ри с. 5). 26. Apodemus agrarius тонки й ки ш ечни к. Trem. 1 У смански й бор, В еневи ти ново 12.07.2002

Plagiorchis elegans det И ванов И .И .

Ри с. 5. Э ти кетки д ля постоянны х препаратов гельми нтов. П репараты х ранят в коллекци онны х ш каф ах , в специ альны х планш етах и ли коробках , какв верти кальном, таки гори зонтальном полож ени и . П ри этом необх од и мо помни ть, что временны е препараты х ранятся только в гори зонтальном полож ени и , а постоянны е препараты мож но х рани ть в верти кальном полож ени и только в том случае, когд а бальзам полностью затверд еет. М Е Т О Д Ы К А Ч Е СТ В Е Н Н О ГО И К О Л И Ч Е СТ В Е Н Н О ГО У Ч Е Т А ГЕ Л Ь М И Н Т О В К ачественны й и коли чественны й учет ж и вотны х (беспозвоночны х и позвоночны х ) является од ни м и з основны х метод ов в больш и нстве зоологи чески х и экологи чески х работ. П од обны е и сслед овани я провод ятся и в отнош ени и гельми нтов. В полевом ж урнале сод ерж и тся и нф ормаци я о вы явленны х ви д ах и ли и ны х таксономи чески х ед и ни цах гельми нтов, о коли чествеобнаруж енны х гельми нтов уи сслед ованны х х озяев. К ачественны й учет пред полагает оценку ви д ового разнообрази я собранны х гельми нтов. В соответстви и с этой зад ачей прои звод и тся опред елени е парази ти чески х червей д о ви д а и си стемати заци я д о более вы соки х таксономи чески х рангов: семейства, отряд а, класса. П олученны е д анны е позволят оцени ть ф ауни сти ческое разнообрази е гельми нтов и сслед уемы х х озяев на уровне крупны х таксонов (классов). С учетом особенностей экологи и х озяев и услови й внеш ней сред ы мож но объясни ть обнаруж енны езакономерности би оразнообрази я парази ти чески х червей.

16

П ри провед ени и сравни тельного анали за ви д ового разнообрази я гельми нтов у си стемати чески и ли экологи чески бли зки х групп и ли ви д ов х озяев, а такж е в связи с услови ями и х оби тани я (услови ями би отопов), и спользую т специ альны е и нд ексы (напри мер, и нд екс Ж аккара и ли и нд екс Серенсена) (Би гон и д р., 1989; М эгарран, 1992). Э ти и нд ексы позволяю т опред ели тьмеру сх од ства с точки зрени я разнообрази я ф ауны гельми нтов, и сслед уемы х х озяев и ли би отопов. И ндекс Ж а кка ра : Cj = j/(a+b-j) И ндекс Серенсена : Cs = 2j/(a+b), гд е j – чи сло общ и х ви д ов гельми нтов у х озяев (х озяи на) на обои х участках ; a – чи сло ви д ов гельми нтов у х озяев (х озяи на) на участке A; b – чи сло ви д ов гельми нтов ух озяев (х озяи на) научасткеB. К оли чественны й учет пред полагает и змерени е частоты встречаемости и уровня зараж енности х озяев гельми нтами . Н а основани и эти х д анны х оцени вается, во-первы х , как часто встречаю тся парази ти чески е черви в и сслед ованной вы борке х озяев, во-вторы х , какова чи сленностьгельми нтов в и сслед ованной вы борке х озяев. К настоящ ему времени и спользую тся след ую щ и епоказатели д ля опред елени я эти х вели чи н (Беклеми ш ев, 1970). Э кст ен си вн ост ь и н вази и , и ли вст реч а ем ост ь, и ли и ндекс вст реч а ем ост и . В стречаемость гельми нтов вы раж ается в процентах и показы вает относи тельное коли чество особей ви д а-х озяи на (ви д ов-х озяев), зараж енны х гельми нтами по отнош ени ю ко всемучи слуи сслед ованны х особей ви д а-х озяи на. П од обную оценку мож но прои звод и ть по отнош ени ю : а) отд ельны х ви д ов гельми нтов; б) группи ровокви д ов и ли более вы соки х рангов таксонов; в) в целом сообщ ества гельми нтов. Н апри мер, у 10 и з 20 и сслед ованны х ры ж и х полевок обнаруж ены гельми нты (разли чны е ви д ы ). О тсю д а экстенси вность и нвази и ры ж ей полевки гельми нтами (в целом сообщ еством) составляет 50.0%. В том чи сле у 5 особей ры ж и х полевок обнаруж ены цестод ы A. dentata. О тсю д а экстенси вность и нвази и ры ж ей полевки эти м ви д ом цестод составляет25.0%. Э кстенси вностьи нвази и (встречаемость) (E) рассчи ты ваю т по ф ормуле: E=n/N· 100%, гд е n – чи сло зараж енны х особей х озяев; N – чи сло и сслед ованны х особей х озяев. И н д екс оби ли я есть сред нее чи сло особей д анного ви д а и ли д анной группы ви д ов (и ли в целом сообщ ества), при х од ящ ееся на ед и ни цу учета. П ри учетегельми нтов первой естественной ед и ни цей учетаслуж и тособьх озяи на, и в этом случае и нд екс оби ли я вы раж ает сред нее чи сло особей гельми нтов на од ну особь х озяи на. Н апри мер, и з 20 и сслед ованны х ры ж и х полевок у 10 обнаруж ено 200 экз. гельми нтов. Разд ели в это чи сло на чи сло и сслед ованны х ж и вотны х (200/20=10), получаем вели чи ну и нд екса оби ли я гельми нтов д ля д анной вы борки и сслед ованны х ж и вотны х -х озяев, которая составляет 10.0. П од обны е расчеты и нд екса оби ли я прои звод ятся по отд ельны м ви д ам и ли бли зки м си стемати чески м группам гельми нтов. Н апри мер, и з 20

17

и сслед ованны х ры ж и х полевок у 5 обнаруж ено 10 экз. цестод A. dentata, вели чи наи нд ексаоби ли я д анного ви д асоставляет0.5 (10/20). И нд екс оби ли я (M) рассчи ты ваю т по ф ормуле: M=m/N, гд е m – чи сло обнаруж енны х гельми нтов в и сслед ованной вы борке х озяев; N – чи сло и сслед ованны х особей х озяев. И н т ен си вн ост ь и н вази и естьсред нее чи сло гельми нтов, рассчи танное на од ну особьзараж енного х озяи на. Н апри мер, и з 20 и сслед ованны х ры ж и х полевоку 10 обнаруж ено 200 экз. гельми нтов. Разд ели в это чи сло на чи сло зараж енны х ж и вотны х (200/10=20), получаем вели чи нуи нтенси вности и нвази и д ля д анной вы борки зараж енны х ж и вотны х -х озяев, которая составляет 20. П од обны е расчеты прои звод ятся и в отнош ени и отд ельны х ви д ов гельми нтов. Н апри мер, и з 20 и сслед ованны х ры ж и х полевоку 5 обнаруж ено 10 экз. цестод A. dentata, вели чи наи нтенси вности и нвази и составляет2.0 (10/5). И нтенси вностьи нвази и (I) рассчи ты вается по ф ормуле: I=m/n, гд е m – чи сло обнаруж енны х гельми нтов в и сслед ованной вы борке х озяев; n – чи сло зараж енны х особей х озяев.

18

К РА Т К И Е СВ Е Д Е Н И Я О Н А И БО Л Е Е Ч А СТ О В СТ РЕ Ч А Ю Щ И Х СЯ ГЕ Л Ь М И Н Т А Х М Е Л К И Х М Л Е К О П И Т А Ю Щ И Х У СМ А Н СК О ГО БО РА М елки е млекопи таю щ и е – это небольш и е по размерам зверьки , являю щ и еся, преж д евсего, пред стави телями д вух отряд ов: гры зунов (Rodentia) и насекомояд ны х (Insectivora) (Громов, Е рбаева, 1995). В услови ях У сманского бора к этой группе млекопи таю щ и х относятся мы ш еви д ны е гры зуны и землеройки . Сред и ни х наи более многочи сленны ми и часто встречаю щ и ми ся ви д ами являю тся: мы ш еви д ны е гры зуны – ры ж ая полевка (Clethrionomys glareolus Schreber, 1780), малая лесная мы ш ь(Apodemus (Sylvaemus) uralensis Pallas, 1811), ж елтогорлая мы ш ь(Apodemus (Sylvaemus) flavicollis, Melchior, 1834) и полевая мы ш ь (Apodemus (Apodemus) agrarius Pallas, 1771); насекомояд ны е: обы кновенная бурозубка (Sorex araneus L., 1758) и малая бурозубка (Sorex minutus L., 1766). В связи с эти м во время летней полевой практи ки на Би останци и В ГУ перечи сленны е вы ш е ви д ы мелки х млекопи таю щ и х могут являться объектами д ля провед ени я гельми нтологи чески х и сслед овани й и освоени я соответствую щ и х метод и к. Гельми нты , которы емогутбы тьобнаруж ены умелки х млекопи таю щ и х , в основном при над леж ат к трем классам парази ти чески х червей: трематод ам (Trematoda), цестод ам (Cestoda) и нематод ам (Nematoda), акантоцеф алы (скребни ) (Acanthocephala) встречаю тся оченьред ко. Собранную коллекци ю гельми нтов необх од и мо опред ели ть, т.е. провести таксономи ческую д и ф ф еренци аци ю . О пред елени е гельми нтов требует знани я и х морф ологи и и си стемати ки и , след овательно, д остаточной под готовки и сслед ователя. Рекоменд уем, во-первы х , преж д е чем при ступи ть к опред елени ю парази ти чески х червей, нуж но сд елатьх отя бы и х каранд аш ны е ри сунки и провести и змерени е тех частей тела и ли органов, особенности строени я которы х являю тся сущ ественны ми в си стемати ке гельми нтов. В овторы х , и спользовать в процессе д анной работы д вух томное и зд ани е «О пред ели тель гельми нтов гры зунов ф ауны СССР» (1978; 1979), а такж е работы В .М . И ваш ки нассоавт. (1971), Т . Генова(1984). Н и ж е мы при вод и м табли цы д ля опред елени я семейств, а в некоторы х случаях — ви д ов наи более часто встречаю щ и х ся гельми нтов у мы ш еви д ны х гры зунов (Ромаш ов, Ш уляк, 1995; Ромаш ов, 1997) и бурозубок в услови ях У сманского бора (Росси йская Ф ед ераци я, В оронеж ская область). Составлены табли цы по отд ельны м группам и ви д ам х озяев (гры зунов и насекомояд ны х ), а такж есучетом локали заци и гельми нтов в тех и ли и ны х органах х озяев.

19

Т аблица для определения семейст в ивидов г ельминт ов, паразит ирую щ их у мы ш евидны х г ры зунов (рыж ая полевка, м алая лесн ая м ыш ь, ж елт огорлая м ыш ь, полевая м ыш ь) Т ремат оды (классTrematoda) П лоски е парази ти чески е черви , тело которы х и меет ли стови д ную ф орму и при плю снуто в больш ей и ли меньш ей степени в д орсо-вентральном направлени и . К ак прави ло, и мею тся д ве при соски : од на располож ена на перед нем конце тела и прони зана ротовы м отверсти ем (ротовая при соска), вторая (брю ш ная) располагается в сред ней части телаи ли мож етбы тьсмещ ена к его зад нему концу. Гермаф род и тны е органи змы , паренх и ма тела которы х заполнена в основном ж енски ми и муж ски ми репрод укти вны ми органами , и мею щ и ми слож ное строени е. Т рематод ы и мею т слож ны й ж и зненны й ци кл, которы й связан счеред овани ем поколени й и со сменой ж и вотны х -х озяев. А . Локали зац и я – т он ки й ки ш ечн и к 1(2). Н а головном конце и меется особая склад ка (ад оральны й д и ск), вооруж енны й од и нарны м и ли д войны м ряд ом х и ти новы х ш и пов … … … … … … … … … … … … .… … … … … … Echinostomatidae (Echinostoma mijagawai) 2(1). А д орального д и скаи х и ти новы х ш и пов нет. 3(4). П оловы е ж елезы располож ены в зад ней части тела, яи чни клеж и т меж д усеменни ками … … … .… … … … . Brachylaemidae (Brachylaemus aequans) 4(3). П оловы е ж елезы располож ены в сред ней части тела и ли несколько сзад и нее. Я и чни к вперед и семенни ков. П етли матки зах од ят меж д у семенни ками … … … … … … … .… … .. Plagiorchidae (Plagiorchis elegans) (П ри лож ени е, ри с. 1). Б . Локали зац и я – т олст ый ки ш ечн и к Брю ш ная при соскаотсутствует, навентральной сторонетелапрод ольны е ряд ы ж елези сты х образовани й… .… … … ..… … Notocotylidae (Notocotylus noyeri) (П ри лож ени е, ри с. 1). В . Локали зац и я печен ь 1(2). Брю ш ная при соска располагается вперед и экватори альной зоны . Бурсаци ррусах орош о разви таи нах од и тся в перед ней части тела. П етли матки зах од ят меж д у семенни ками … … … … … … … … … … … … .. Plagiorchidae (Skrjabinoplagiorchis vigisi) 2(1). Брю ш ная при соска располагается в экватори альной зоне, бурса ци рруса отсутствует и ли слабо разви та, половое отверсти е нах од и тся в зад нем концетела..… ..… … … … Lecithodendriidae (Posterocirrus clethrionomi) Ц ест оды (классCestoda) П лоски епарази ти чески ечерви , тело которы х состои ти з многочи сленны х члени ков (проглотти д ) и и меет лентови д ную ф орму, отсю д а названи е – ленточны е черви (цестод ы ). Т ело под разд еляется на три отд ела: голову (сколекс), какправи ло, снабж енную при сосками , ш ейку и строби лу (члени стое тело). Ц естод ы – гермаф род и тны еоргани змы , и мею тслож ны й ж и зненны й ци кл

20

с од ной и ли д вумя ли чи ночны ми стад и ями . М ы ш еви д ны е гры зуны часто являю тся промеж уточны ми х озяевами и у ни х обнаруж и ваю тся ли чи ночны е ф ормы цестод . А . Локали зац и я – т он ки й ки ш ечн и к 1(2). Сколекс обы чно и меет х оботок, вооруж енны й од ни м (реж е д вумя) ряд ом крю чьев. Семенни ки немногочи сленны е, ред ко более трех ...… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … . Hymenolepididae 2(1). Сколекс ли ш ен х оботка и крю чьев. Семенни ки , как прави ло, многочи сленны е. 3(4). Ч лени ки вы тянуты в поперечном направлени и , прод ольная осьматки располагается поперекчлени ка… … … … … … … … .… Anoplocephalidae (Anoplocephaloides dentata, Paranoplocephala gracilis, Paranoplocephala omphalodes) (П ри лож ени е, ри с. 2). 4(3). Ч лени ки вы тянуты в прод ольном направлени и , матка и меет ф орму прод ольного стволасбоковы ми ветвями … … … … ... Catenotaeniidae (Catenotaenia cricetorum, Catenotaenia pusilla, Pseudocatenotaenia matovi) (П ри лож ени е, ри с. 2). Л ич иноч ны е ф ормы цест од (ларвоцист ы ) – мы ш еви д ны е гры зуны являю тся промеж уточны ми х озяевами , д еф и ни ти вны е х озяева – х и щ ны е млекопи таю щ и е и ли х и щ ны е д невны е и ночны е пти цы . О сновны ми д и ф ф еренци альны ми при знаками при опред елени и ли чи нокцестод являю тся: 1) ф орма и размеры ларвоци ст; 2) ф орма и размеры крю чьев (если сколекс вооруж ен крю чьями ); 3) ф орма и размеры при сосок (и ли ботри й) («О пред ели тельгельми нтов гры зунов ф ауны СССР», 1978; 1979, Генов, 1984). У мы ш еви д ны х гры зунов в основном реги стри рую тся ларвоци сты , при над леж ащ и е к ци клоф и лли д ны м цестод ам (отряд Cyclophyllidea). С и спользовани ем указанны х вы ш еопред ели телей и д руги х специ али зи рованны х работли чи нки цестод мож но опред ели тьд о ви д а. В услови ях У сманского боразареги стри ровано 7 ви д ов ли чи ночны х ф орм цестод , парази ти рую щ и х у мы ш еви д ны х гры зунов (Ромаш ов 1997; Ромаш ова, 1998; Ромаш ова, Х и цова, 2003). Paruterina candelabraria – х озяева: ры ж ая полевка, полевая мы ш ь; локали заци я: печень, сколексвооруж ен крю чьями (П ри лож ени е, ри с. 7). Taenia martis – х озяева: ры ж ая полевка; локали заци я: груд ная и брю ш ная полости , сколексвооруж ен крю чьями (П ри лож ени е, ри с. 7). Taenia hydatigena – х озяева: ры ж ая полевка, мы ш и : малая лесная, ж елтогорлая и полевая; локали заци я: серозны е покровы органов брю ш ной полости , печень, сколексвооруж ен крю чьями . Hydatigera taeniaeformis – х озяева: ры ж ая полевка, мы ш и : малая лесная, ж елтогорлая и полевая; локали заци я: печень, сколекс вооруж ен крю чьями (П ри лож ени е, ри с. 7). Tetratirotaenia polyacantha – х озяева: ры ж ая полевка; локали заци я: груд ная и брю ш ная полости , сколексвооруж ен крю чьями (П ри лож ени е, ри с. 7).

21

Cladotaenia globifera – х озяева: ры ж ая полевка; локали заци я: печень, сколексвооруж ен крю чьями . Mesocestoides lineatus – х озяева: ры ж ая полевка, малая лесная и полевая мы ш и ; локали заци я: груд ная и брю ш ная полости , печень, сколексневооруж ен. Н емат оды (классNematoda) К руглы е парази ти чески е черви , и мею т круглое (в поперечном сечени и ) уд ли ненное веретенови д ное тело, перед ни й и зад ни й концы которого заострены . Снаруж и тело покры то кути кулой. Н ематод ы – разд ельнополы е органи змы , у которы х отчетли во вы раж ен половой д и морф и зм. Самцы , как прави ло, меньш е самок. Н а перед нем конце тела терми нально располагается ротовое отверсти е. А нальное отверсти е локали зуется субтерми нально на вентральной поверх ности . П оловая си стема у самцов и самокчащ е д войная, реж е од и нарная. Ж енское половое отверсти е чащ е всего располагается в перед ней полови нетелаи леж и твентрально. У самцов нах востовом конце, как прави ло, и мею тся бурсальны е кры лья и и ны е кути кулярны е вы росты , образую щ и е х востовую бурсу. П и щ евари тельная си стема состои т и з трех отд елов: пи щ евод а, сред ней и зад ней ки ш ок. Размеры круглы х червей варьи рую тв оченьш и роки х пред елах . А . Локали зац и я – ж елу д ок 1(2). Т онки е ни теви д ны е нематод ы , перед няя частьтела которы х тоньш е зад ней. П и щ евод ная трубка окруж ена ж елези сты ми клетками (сти х оци тами ). Я йцаскры ш ечками наполю сах … … … … Capillariidae (Capillaria murissylvatici) 2(1). О тноси тельно толсты ечерви , при мерно од и наковой ш и ри ны по всей д ли не тела. П и щ евод не окруж ен клетками , яйца без кры ш ечекна полю сах . Ротовая капсула разви та и снабж ена трех лопастны ми латеральны ми псевд олаби ями . Н а каж д ой и з лопастей псевд олаби и и меется опред еленное чи сло зубов … ...… … … … … … … … … … … … .Spiruridae (Mastophorus muris) Б . Локали зац и я – т он ки й ки ш ечн и к 1(4). Х востовой конец самца с ти пи чной кути кулярной бурсой, под д ерж и ваемой ребрами . 2(3). Спи кулы д ве, относи тельно д ли нны е и тонки е. П оловой аппарат самки од и нарны й … … … … … … … ...… ..… ..Heligmosomidae (Heligmosomoides glareoli, Heligmosomoides polygyrus, Heligmosomum costellatum) (П ри лож ени е, ри с. 3). 3(2). Спи кулы д ве, относи тельно коротки е и толсты е. П оловой аппарат самки д войной .… … … … … … … … … … ..… … … … … Trichostrongylidae 4(1). Х востовой конец самцабез ти пи чной кути кулярной бурсы . К ути кула покры та гребнями , ротовое отверсти е несколько сд ви нуто д орсально … … … … … … … … … … … ..… … … … … Rictulariidae (Rictularia proni) В . Локали зац и я – т олст ый ки ш ечн и к

22

1(2). П еред ни й конец тела тонки й, ни теви д ны й, пи щ евод ная трубка окруж ена ж елези сты ми клетками (сти х оци тами ). Зад ни й конец тела резко расш и рен, яйца с кры ш ечками на полю сах … … … … … … … … Trichocephalidae (Trichocephalus muris) (П ри лож ени е, ри с. 6). 2(1). Т ело постепенно суж ается кзад нему и перед нему концам. Я йца без кры ш ечекнаполю сах . 3(4). П ри клоакальная мускулатура образует при соску (с х и ти новы м обод ком). И меется д ве спи кулы … … … … … … … … … … … ..… … .… Heterakidae (Ganguleterakis spumosa) (П ри лож ени е, ри с. 6). 4(3). П ри клоакальной при соски у самцов нет. Спи кула од на и ли отсутствуетвообщ е. 5(6). И мею тся спи кула и рулек … … … … … … … … … … … … Syphaciidae (Syphacia agraria (полевая мы ш ь), Syphacia montana (ры ж ая полевка), Syphacia obvelata (мы ш и : малая лесная, ж елтогорлая, д омовая), Syphacia petrusewiczi (ры ж ая полевка), Syphacia stroma (мы ш и : малая лесная, ж елтогорлая и полевая) (П ри лож ени е, ри с. 5). 6(5). Спи кула и рулекотсутствую т (спи кула и ногд а мож ет бы тьв ви д е руд и мента)… … … … … … … .… … … … Heteroxynematidae (Aspiculuris tetraptera) Г . Локали зац и я – печен ь Т онки е ни теви д ны е нематод ы , перед няя часть тела которы х тоньш е зад ней. П и щ евод ная трубка окруж ена ж елези сты ми клетками (сти х оци тами ). Я йца с кры ш ечками на полю сах … … ..… … … Capillariidae (Capillaria hepatica) (П ри лож ени е, ри с. 4).

23

Т аблица для определения семейст в ивидов г ельминт ов, паразит ирую щ их у насекомоядны х (обыкн овен н ая бу розу бка, м алая бу розу бка) Т ремат оды (классTrematoda) А . Локали зац и я – ж елу д ок 1(2). П оловы е ж елезы располож ены в зад ней части тела, яи чни клеж и т меж д усеменни ками … … … … ..… … … … … … … … … … … … … .. Brachylaemidae 2(1). П оловы е ж елезы располож ены в сред ней части тела и ли несколько сзад и нее. Я и чни к вперед и семенни ков. П етли матки зах од ят меж д у семенни ками .… … … … … … … … … … … … … … ..… … … … Plagiorchidae Б . Локали зац и я – ки ш ечн и к 1(4). П оловы е ж елезы располож ены в зад ней части тела. П етли матки не зах од ятмеж д усеменни ками 2(3). Я и чни к леж и т меж д у семенни ками . Семенни ки и мею т округлую ф орму....… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … Brachylaemidae 3(2). Я и чни клеж и т вперед и семенни ков. Семенни ки и мею т уд ли ненную (овальную ) ф орму… … … … … … … … … … … … . Omphalometridae 4(1). П оловы е ж елезы располож ены в сред ней части тела и ли несколько сзад и нее. Я и чни к вперед и семенни ков. П етли матки зах од ят меж д у семенни ками … … … … … … … … … … … … … … … ..… … .. Plagiorchidae В . Локали зац и я – печен ь 1(2). Семенни ки располагаю тся вбли зи брю ш ной при соски , вперед и яи чни каи матки … … … … … … … … … … … … … … … … … … … Dicrocoeliidae 2(1). Семенни ки располож ены в зад ней части тела, позад и яи чни ка и матки … … … … … … … … … … … … … … … .… … … … … … … … … .Opisthorchidae Ц ест оды (классCestoda) А . Локали зац и я – ки ш ечн и к 1(2). Сколекс вооруж ен од ни м ряд ом крю чьев. Семенни ки немногочи сленны е(неболеетрех ) … … … … … … … … … … … ..Hymenolepididae 2(1). Сколекс вооруж ен од ни м и ли д вумя ряд ами крю чьев. Семенни ки многочи сленны е… … … … … … … … … … … … … … ..… … … … … … … Dilepididae Н емат оды (классNematoda) А . Локали зац и я – ж елу д ок и пи щ евод Т онки е ни теви д ны е нематод ы , перед няя часть тела которы х тоньш е зад ней. П и щ евод ная трубка окруж ена ж елези сты ми клетками (сти х оци тами ). Я йцаскры ш ечками наполю сах … … … … … … … Capillariidae (Capillaria minuta, Eucoleus oesophagicola) Б . Локали зац и я – ки ш ечн и к 1(2). Т онки е ни теви д ны е нематод ы , перед няя частьтела которы х тоньш е зад ней. П и щ евод ная трубка окруж ена ж елези сты ми клетками (сти х оци тами ). Я йцаскры ш ечками наполю сах ..… … … … … … Capillariidae (Capillaria minuta)

24

2(1). Т ело при мерно од и наковой ш и ри ны на всем протяж ени и . П и щ евод неокруж ен ж елези сты ми клетками . 3(4). Х востовой конец самцабез кути кулярной бурсы . В маткесод ерж атся малочи сленны е и очень крупны е яйца… … … … … Strongyloididae (Parastrongyloides winchesi) 4(3). Х востовой конец самца с ти пи чной кути кулярной бурсой, под д ерж и ваемой ребрами . Спи кулы д ве, относи тельно д ли нны е и тонки е. .… … … … … … … … … … … … ...… … … .… Heligmosomidae (Longistriata depressa) В . Локали зац и я – м очевой пу зырь Т онки е ни теви д ны е нематод ы , перед няя часть тела которы х тоньш е зад ней. П и щ евод ная трубка окруж ена ж елези сты ми клетками (сти х оци тами ). Я йцаскры ш ечками наполю сах … … … … … . Capillariidae (Capillaria incrassata) Г . Локали зац и я – печен ь и селезен ка Т онки е ни теви д ны е нематод ы , перед няя часть тела которы х тоньш е зад ней. П и щ евод ная трубка окруж ена ж елези сты ми клетками (сти х оци тами ). Я йца с кры ш ечками на полю сах ..… … … … … … Capillariidae (Capillaria soricicola, Capillaria splenaeca) Д . Локали зац и я – орган ы д ыхан и я 1(2). О тноси тельно масси вны енематод ы , вульварасполагается в сред ней части тела самок. Самцы с умеренно разви той бурсой. П арази ты бронх ов … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … ... Crenosomatidae 2(1). Т онки е неж ны е нематод ы , вульварасполагается в зад ней части тела самок. У самцов бурсаслабо разви таи ли отсутствует. П арази ты тканей легкого ..… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … Filaroididae

25

О СН О В Н А Я Л И Т Е РА Т У РА Би ологи я: У чеб. д ля студ ентов мед . спец. вузов: в 2-х т. В .Н . Я ры ги н, В .И . В аси льева, И .Н . В олков и д р. - М : В ы сш . ш к, 2000. – К н. 1 – 393 с; К н. 2 – 351 с. Ромаш ов Б.В . Гельми нты гры зунов би останци и В оронеж ского уни верси тета / Б.В . Ромаш ов, А .В . Ш уляк// Состояни еи проблемы экоси стем Сред него П од онья. Т р. би ол. учеб.-науч. базы В ГУ . – 1995. – В ы п. 6. – С. 101-106. Ромаш ов Б.В . Гельми нты мы ш еви д ны х У сманского бора / Б.В . Ромаш ов // Разви ти е при род ны х комплексов У смань-В оронеж ски х лесов на заповед ной и антропогенной терри тори ях . Т р. В оронеж ского би осф ерного госуд арственного заповед ни ка. – 1997. – В ы п. 23. – С. 186-206. М эгарран Э . Э кологи ческое разнообрази е и его и змерени е/ Э . М эгарран / П ер. сангл. Н .В . М атвеевой; П од ред . Ю .И . Ч ернова. – М .: М и р, 1992. – 184 с.

Д О П О Л Н И Т Е Л Ь Н А Я Л И Т Е РА Т У РА Беклеми ш ев В .Н . Би оценологи чески е основы сравни тельной парази тологи и / В .Н . Беклеми ш ев. – М .: Н аука, 1970. – 502 с. Би гон М . Э кологи я. О соби , популяци и и сообщ ества /М . Би гон, Д . Х арпер, К . Т аунсенд : В 2 т. / П ер. сангл. В .Н . М и х ееваи М .А . Снеткова; П од ред А .М . Ги лярова. – М .: М и р, 1989. – Т . 1. – 667 с., Т . 2 – 477 с. Громов И .М . М лекопи таю щ и е ф ауны Росси и и сопред ельны х терри тори й. Зайцеобразны еи гры зуны / И .М . Громов, М .А . Е рбаева. – СП б., 1995. – 522 с. И ваш ки н В .М . М етод ы сбораи и зучени я гельми нтов наземны х млекопи таю щ и х / В .М . И ваш ки н, В .Л . К онтри мави чус, Н .С. Н азарова. – М .: Н аука, 1971. – 123 с. К арташ ев Н .Н . П ракти кум по зоологи и позвоночны х / Н .Н . К арташ ев, В .Е . Соколов, И .А . Ш и лов. – М .: В ы сш . ш кола, 1969. – 372 с. О пред ели тельгельми нтов гры зунов ф ауны СССР. Ц естод ы и трематод ы / К .М . Ры ж и ков, Е .В . Гвозд ев, М .М . Т окобаев и д р. – М .: Н аука, 1978. – 232 с. О пред ели тельгельми нтов гры зунов ф ауны СССР. Н ематод ы и акантоцеф алы / К .М . Ры ж и ков, Е .В . Гвозд ев, М .М . Т окобаев и д р. – М .: Н аука, 1979. – 272 с. Роски н Г.И . М и кроскопи ческая тех ни ка/ Г.И . Роски н, Л .Б. Л еви нсон; П од ред . Г.И . Роски на. – 3-еи зд . – М .: Советская наука, 1957. – 467 с. Суд ари ков В .Е . К метод и ке работы с метацеркари ями трематод отряд а Strigeidida / В .Е . Суд ари ков, А .А . Ш и ги н // Т р. Л аборатори и Гельми нтологи и А Н СССР. – 1965. – Т . 15. – С. 158-166. Генов Т . Х елми нти на насекомояд ни те бозайни ци и гри зачи те в Българи я / Т . Генов. – Соф и я: И зд -во наБългарскатаА кад еми я нанауки те, 1984. – 348 с.

26

П РИ Л О Ж Е Н И Е

27

Ри с. 1. А – Notocotylus noyeri Joyeux, 1922 (ори г.): а– общ и й ви д мари ты ; б – располож ени евентральны х папи лл; в – яйца. Б – Plagiorchis elegans (Rudolphi, 1802) (по Генову, 1984): общ и й ви д мари ты .

28

Ри с. 2. А – Catenotaenia cricetorum Kirschenblatt, 1949 (ори г.): а– сколекс; б – гермаф род и тны й члени к; в – зрелы й члени к. Б – Anoplocephaloides dentata (Galli– Valerio, 1905) (по Генову, 1984): а – сколекс; б – гермаф род и тны й члени к.

29

Ри с. 3. Heligmosomoides glareoli (Baylis, 1928) (ори г.): а– головной конец; б – поперечны й срез в серед и нетела; в – яйцо; г– х востовой конец самца; д – х востовой конец самки .

30

31

Ри с. 4. Capillaria hepatica (Bancroft, 1893) (ори г.): а– головной конец; б – самка, область вульвы ; в – самка, х востовой конец; г – яйцо; д – самец, х востовой конец.

32

Ри с. 5. Syphacia petrusewiczi Bernard, 1966 (ори г.): а– головной конец; б – самка, х востовой конец; в – яйца; г– самец, общ и й ви д .

33

Ри с. 6. А – Trichocephalus muris Schrank, 1788 (по Скряби нуи д р., 1957): а – самка, общ и й ви д ; б – самец, общ и й ви д . Б – Ganguleterakis spumosa (Schneider, 1866) (по Ш арпи ло, 1979): а – головной конец; б – х востовой конец самки ; в – областьвульвы ; г– х востовой конец самца.

34

Ри с. 7. К рю чья ли чи нок цестод (ори г.): а – Paruterina candelabraria (Goeze, 1782); б – Hydatigera taeniaeformis (Batsch, 1786); в – Tetratirotaenia polyacantha (Leuckart, 1856); г– Taenia martis (Zeder, 1803).

Д ля заметок

35

С ост авит ели: Ромаш ов Бори сВ и тальеви ч, Х и цоваЛ ю д ми лаН и колаевна, Т руф ановаЕ ленаИ вановна, Ромаш оваН аталья Бори совна. Р едакт ор: Буни наТ .Д .