Циклоферон. Клиническая фармакология и терапия: Руководство для врачей

Ф.И. Ершов, А.Л. Коваленко, М.Г. Романцов, С.Ю. Голубев

ЦИКЛОФЕРОН КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ И ТЕРАПИЯ

Москва - Санкт-Петербург 1998 3

Российская Академия медицинских наук Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи Научно-технологическая фармацевтическая фирма “Полисан”

Ф.И. Ершов, А.Л. Коваленко, М.Г. Романцов, С.Ю. Голубев

ЦИКЛОФЕРОН КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ И ТЕРАПИЯ Руководство для врачей

Москва -Санкт-Петербург 1998 4

Ершов Ф.И., Коваленко А.Л., Романцов М.Г., Голубев С.Ю. Циклоферон. Клиническая фармакология и терапия: Руководство для врачей. М.; СПб., 1998. 109 с. - ISBN 5-88874-040-3. В руководстве суммированы результаты многолетних исследований фармакологии и терапии отечественного индуктора интерферона - циклоферона (регистрационный № 95/211/5), обладающего широким спектром биологической активности. Представлены результаты экспериментальных и клинических исследований препарата, проведенных в ведущих научных и медицинских учреждениях РФ. Рассчитано на широкий круг врачей, фармацевтов, биологов, аспирантов и студентов медицинских вузов и всех интересующихся лекарственными средствами нового поколения.

Авторский коллектив: Ю.В. Аспель, Л.Е. Алексеева, В.Н. Анисимов, В.В. Бржеский, Г.В. Богоявленский, И.А. Виноград, Н.А. Виноград, С.Г. Вишнев, В.И. Головкин, Н.С. Голубев, С.Ю. Голубев, Ю.Н. Громыко, Д.К. Ермоленко, Ф.И. Ершов, В.А. Исаков, А.В. Каземирский, Е.Ю. Карпович, С.Е. Колбасов, А.Л. Коваленко, Н.В. Корнилов, Т.А. Куляба, А.Д. Лавлинский, Г.М. Манихас, С.И. Моисеев, Э.В. Москалев, К.А. Новоселов, М.Г. Романцов, Т.Н. Саватеева, М.М. Сафронова, А.Е. Семенов, Е.Е. Сомов, В.П. Сухинин, И.А. Поляков, Л.П. Царевский, В.Н. Хрулев, А.А. Щипкова

Рецензенты: профессор В.В. Малиновская; доктор биологических наук А.Н. Наровлянский.

ISBN 5-88874-040-3

© Ф.И. Ершов, А.Л. Коваленко, М.Г. Романцов, С.Ю. Голубев, 1998 5

Феликс Иванович Ершов, Алексей Леонидович Коваленко, Михаил Григорьевич Романцов, Сергей Юрьевич Голубев ЦИКЛОФЕРОН КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ И ТЕРАПИЯ Руководство для врачей Редактор Н.Н. Мартынюк. Подписано в печать 06.01.1998 г. Формат 60×90 1/16. Бумага для множительных аппаратов. Ризограф. Усл. печ. л. 6,8. Уч.-изд. л. 7,5. Тираж 150 экз. Заказ . Калининградский государственный университет, 236041, г. Калининград, ул. А. Невского, 14. 6

ВВЕДЕНИЕ Циклоферон изначально отнесен нами к разряду индукторов интерферона, так как прежде всего бросалась в глаза его ярко выраженная способность быстро “включать” систему интерферона в клетках, органах и тканях широкого круга экспериментальных животных. В результате многолетних доклинических исследований циклоферон выдвинулся в число наиболее активных низкомолекулярных синтетических индукторов интерферона. Циклоферону оказались свойственны черты классических противовирусных химиопрепаратов и стимуляторов иммунного ответа. При введении в организм больных циклоферон одновременно действует на возбудителя заболевания (этиотропный эффект) и стимулирует специфическую (иммунитет) и неспецифическую (интерферон) резистентность. Такая полифункциональность действия во многом объясняет выявленный к настоящему времени универсально широкий спектр терапевтической эффективности циклоферона и уже определившиеся показания его клинического применения. Сам по себе факт соединения в одном препарате этиотропных, иммуномодулирующих и патогенетических свойств позволяет отнести его к новому поколению лекарственных средств, перспективных для дальнейшего клинического применения. Краткие сведения о препарате 1. Название препарата 2. Состав препарата: 3. Лекарственная форма 4. Способ применения 5. Основные показания

- циклоферон - водорастворимый синтетический аналог природного алкалоида из культуры Citrus grandis - ампулы, содержащие 12,5% раствор - внутривенные или внутримышечные инъекции - вирусные инфекции (грипп, ОРЗ, герпес, гепатиты А, В, С; ВИЧ-инфекция, инфекции ЦНС); урогенитальные хламидиозы; ревматоидные и реактивные артриты; рассеяный склероз; вторичные иммунодефицитные и другие состояния 7

6. Сроки хранения 7. Стандартная упаковка 8. Фирма-производитель

- 2 года при комнатной температуре - коробка, содержащая 5 ампул, лист-вкладыш - научно-технологическая фармацевтическая фирма “Полисан” (Санкт-Петербург, Россия)

На 17 Международном конгрессе по химиотерапии, (Западный Берлин, ФРГ) препарат получил 1-ю премию. Имеется лицензия РФ и патенты ФРГ и США. Представленные результаты клинического использования циклоферона следует рассматривать лишь как первый пласт потенциальных возможностей этого препарата. Сейчас уже можно утверждать, что в обозримом будущем область клинического применения циклоферона значительно расширится и этот препарат займет достойное место в лечении онкологических, гинекологических, аутоиммунных и других заболеваний. Руководитель отдела интерферонов НИИЭММ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, член-корреспондент Российской Академии медицинских наук, профессор Ф.И. Ершов

8

Заведующий кафедрой профилактической медицины Калининградского государственного университета, профессор М.Г. Романцов член-корреспондент Академии Естествознания РФ

ИНФОРМАТИВНО-РЕГУЛЯТОРНАЯ РОЛЬ ИНТЕРФЕРОНОВ В КЛЕТОЧНЫХ И МЕЖКЛЕТОЧНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯХ Среди многочисленных цитокинов, обладающих контрольнорегуляторными функциями, особое место отводят интерферонам (ИФН). К настоящему времени известно около 20 ИФН, различающихся по структуре и биологическим свойствам и составляющих три типа (α, β, γ), объединенных в два вида: 1-й - α и β, 2-й - γ. Они относятся классу индуцибельных белков и представляют собой гликопротеиды с молекулярной массой 2030 кД. Интерфероны защищают организм от инфицирования вирусами, бактериями, простейшими, потенцируют лимфокины, ингибируют рост злокачественных клеток. Противовирусное действие интерферонов осуществляется через систему клеточного синтеза нуклеиновых кислот с помощью ряда ферментов и ингибиторов, приводящих к деградации чужеродной генетической информации. Тип 1 составляют ИФН-α, секреция которых осуществляется макрофагами и микрофагами (полиморфно-ядерными лейкоцитами, ПЯЛ) и индуцируется вирусами или синтетическими полинуклеотидами и ИФН-β, секреция которого осуществляется фибробластами. Тип 2 включает ИФН-γ, или иммунный, который синтезируется сенсибилизированными лимфоцитами при активации их неспецифическими митогенами. При индукции ИФН синтезируются два его типа, которые обладают видотканевой специфичностью. Использование комплекса ИФН заданной специфичности, а не отдельных пептидов открывает возможность коррекции патологических процессов. Продукция ИФН закодирована в генетическом аппарате клетки. Интерферонообразование регулируется 21 парой хромосом. Ген для ИФН-α расположен в 9 хромосоме, а для ИФН-γ в 11 хромосоме. Основные механизмы действия ИФН заключаются в следующем: после связывания молекулы ИФН со специфическим рецептором сигнал передается внутрь клетки и потенцирует появление нескольких ферментативных активностей. В результате этого происходит формирование одного из факторов инициации трансляции, что блокирует процессы синтеза белка (Samuel C. E., 1984). С другой стороны, активируется специфическая внутриклеточная рибонуклеаза, приводящая к быстрой деградации матричных РНК (Verhaegen-Lewalleb. et al., 1982). В совокупности эти процессы приводят к обратимой приостановке синтетических процессов в клетке. Опираясь на такое обощенное представление о механизмах действия ИФН, до9

вольно легко объяснить антивирусные и антипролиферативный эффекты ИФН: ингибированием процессов транскрипции и трансляции обусловливается прекращение репликации вирусов (антивирусный эффект) или торможение размножения клеток (антипролиферативный эффект). Эти эффекты, присущие ИФН, делают его универсальным фактором неспецифической резистентности, обеспечивают защиту организма от внутриклеточных агентов, таких как вирусы, хламидии, микоплазмы; воздействуя на чужеродные нуклеиновые кислоты путем их распознавания и элиминации, опосредованно поддерживающим нуклеиновый гомеостаз. ИФН - это единая система регуляции функций клеток и межклеточных взаимодействий полипептидными молекулами. В процессе воспаления, иммунного ответа, иммунопатологических состояний ИФН выполняют роль короткодистантных медиаторов межклеточного взаимодействия. Независимо от того секретируются ИФН или только экспрессируются они связываются со специфическими рецепторами на клетках-мишенях. ИФН не обладает ферментативной и химической активностью, а действие их проявляется опосредованно через клетки-мишени с помощью вторичных мессенджеров. И в этом ИФН подобны гормонам, оказывая действие на клетку-продуцент (аутокринное действие) и на соседние с ней клетки, а также на отдаленные от нее клетки (эндокринное действие). Такие сложные межклеточные взаимодействия позволяют рассматривать цитокины вообще, а ИФН в частности как “микроэндокринную систему”. В связи с этим ИФН отводят важную роль медиаторов, обеспечивающих связь между нейроэндокринной и иммунной системами. Действие ИФН реализуется по сетевому принципу, т.е. передаваемая клеткой информация содержится не в индивидуальном пептиде, а в наборе регуляторных цитокинов. Один медиатор часто вызывает секрецию мишени второго клеткой-мишенью и т.д., что получило название цитокинового каскада. Включение каскада обусловливает синэргетические или антагонистические действия медиаторов, индукцию выработки ими друг друга, а также трансмодуляцию поверхностных рецепторов к другим медиаторам. Контрольно-регуляторные функции ИФН многообразны и направлены на сохранение гомеостаза. Широко известно противовирусное, антимикробное, антипролиферативное, гормоноподобное, радиопротекторное и иммуномодулирующее действие. Среди проявлений иммуномедиаторных свойств ИФН стоит особо выделить: 1. Увеличение числа Fc-рецепторов к JgG на мембранах макрофагов под действием ИФН, что способствует выполнению таких важных функций, как фагоцитоз и антителозависимость цитотоксичность (Vogel J et al., 1983). 10

2. Воздействуя на активность естественных киллеров, ИФН являются основными модуляторами системы естественной цитотоксичности (Herberman et al., 1982). 3. Усиление экспрессии на поверхности клеток антигенов гистосовместимости 1-го класса под действием ИФН-α и ИФН-β (Zin Kernagel R., Doherty P., 1974). 4. ИФН-α/β является мощным ингибитором Т-супрессоров, а ИФН-γ активирует их и индуцирует синтез растворимого фактора супрессии иммунного ответа (Noma T., Dorf M., 1985). 5. Усиление экспрессии антигенов гистосовместимости 2-го класса под действием ИФН-γ (Basham T.Y., Merigan T. C., 1983) приводит к увеличению функциональной активности антигенпрезентирующих клеток, усилению сенсибилизации Т-хелперов, увеличению цитотоксичности моноцитов, повышению секреции лимфокинов, таких как фактор некроза опухоли и интерлейкин-2 (Dlackman M., Morris A., 1985). Этим перечислением не исчерпываются все функции ИФН. Исследования последних лет открывают новые свойства системы ИФН, напрямую или косвенно связанные с функционированием иммунной системы (регуляция активности трофобластов Roberts., Cross J., 1992), нейроэндокринные функции (Plata-Salaman., 1992), регуляция роста и дифференцировки клеток (Kimchi A., 1992). Антивирусные свойства в большей степени выражены у ИФН-α и ИФН-β, в то время как иммунорегуляторные и антипролиферативные - у ИФН-γ. Посредством реализации этих свойств и сочетания их с функциями ингибирования основных клеточных репродуктивных процессов достигается высокая эффективность и универсальность ИФН как факторов, обеспечивающих защиту организма от широкого спектра инфекционных агентов (вирусы, микроорганизмы, грибы), а также при аутоиммунной и неопластической патологии. По значимости система ИФ приближается к системе иммунитета, а по универсальности превосходит ее. Иммуномодулирующее действие ИФН реализуется через усиление экспрессии поверхностных антигенов главного комплекса гистосовместимости 1-го и 2-го классов, повышающее эффективность иммунного распознавания измененных клеток; рекрутирование эффекторных клеток путем модулирования процессов их дифференцировки, созревания и пролиферации; активации эффекторных клеток; становление гуморального иммунитета, экспрессию JgG-FcR, более того, ИФН-γ является незаменимым фактором дифференцировки В-клеток. Показано (Фрейдлин И.С., 1995), что ИФН-γ резко усиливает эффекторные функции макрофагов, их антимикробную и противоопухолевую активность за счет повышения продукции супероксидных и нитрооксидных радикалов. Кроме того, усиление иммунного фа11

гоцитоза и антиопосредованной цитотоксичности макрофагов под влиянием ИФН-γ связано с усилением экспрессии Fcγ-рецепторов LgG. Очевидно, это участие ИФН-системы в поддержании гомеостаза обусловлено антигенами, подключающими эту систему к активной функциональной деятельности (Сидорова Л.Д., 1993). Практически любой антиген является интерфероногеном, в то числе и аутоантиген. Следовательно, высвобождение ИФН является не только маркером активации макрофагов, ПЯЛ, лимфоцитов и других клеток, но и определяет контрольно-регуляторные межклеточные взаимодействия в связи со значительными изменениями адгезивных свойств мембран клеток и экспрессии рецепторов для медиаторов, что существенно для механизмов формирования патологического процесса, его течения и исхода. ИССЛЕДОВАНИЕ ОСТРОЙ, ПОДОСТРОЙ И ХРОНИЧЕСКОЙ ТОКСИЧНОСТИ Эксперименты выполнялись на белых беспородных крысах, белых мышах обоего пола. Длительность карантина для всех животных составляла четырнадцать дней. В течение карантина проводили ежедневный осмотр каждого животного (поведение и общее состояние), дважды в день животных наблюдали в клетках (заболеваемость и смертность). Перед началом исследования животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, были распределены на группы с помощью метода рандомизации. Животные, не соответствующие критериям, были исключены из исследования. Клетки с животными помещались в отдельные комнаты. Световой режим: 12 часов - свет, 12 часов - темнота. Температура воздуха поддерживалась в пределах 19-25˚ C, относительная влажность - 50-70%. Температура и влажность воздуха регистрировались ежедневно. При изменении погодных условий контролировался воздухообмен в помещении путем измерения содержания в воздухе углекислого газа и аммиака. Был установлен режим проветривания, обеспечивающий концентрацию СО2 - не более 0,15 объемных %, аммиака - не более 0,001 мг/л. В течение исследования каждое животное осматривалось ежедневно. Осмотр включал в себя оценку общего поведения и общего состояния животных. Перечень регистрируемых показателей включал: измерение массы тела; учет потребления животными воды и пищи; измерение ректальной температуры; проведение физиологических тестов - "открытое поле", изучение 12

спонтанной двигательной активности животных, проведение электрокардиографического обследования и измерение систолического артериального давления. Были изучены секреторная функция почек и антитоксическая функция печени (проба с феноловым красным и гексеналовый тест). Лабораторные исследования включали: проведение гематологических и биохимических исследований, изучена коагулограмма, миелограмма, а также проведено исследование мочи животных. Перечисленные лабораторные исследования были проведены до начала исследования, на 30-й и на 180-й день, а при выявлении статистически значимых сдвигов - через 30 дней после отмены препарата. Забор крови у животных осуществлялся после 14-15-часового голодания. Патоморфологическому исследованию подлежали все животные, получавшие максимальную дозу, и все контрольные животные - в конце исследования. Патоморфологическое исследование включало некропсию, макроскопическое исследование, взвешивание и гистологическое исследование внутренних органов. Некропсия выполнялась под непосредственным наблюдением патоморфолога. После эфтаназии животные были тщательно обследованы на предмет наружных патологических признаков. Осмотр мест инъекций (кожи, подкожной жировой клетчатки, вены) позволил оценить местно-раздражающее действие исследуемого препарата. Было проведено исследование состояния грудной и брюшной полостей, микроскопическое исследование внутренних органов. Проведенные экспериментальные исследования острой токсичности показали, что лекарственная форма препарата циклоферон при введении экспериментальным животным не оказывает токсического действия. Величины ЛД50 при в/ж введении мышам и крысам разного пола колеблются от 7000 до 11000 мг/кг, при в/м - от 1500 до 2000 мг/кг, а при в/в - от 900 до 1300 мг/кг. В/в и в/м введение беспородным собакам в дозе 500 мг/кг, что в 50-60 раз превышает максимальную терапевтическую дозу, не вызывает существенных изменений общего состояния, поведения и структуры внутренних органов. Следовательно, результаты токсикометрии, данные некропсии и наблюдений за экспериментальными животными в постинтоксикационном периоде острого отравления позволяют отнести лекарственную форму препарата циклоферон к V классу практически нетоксичных лекарственных веществ (Hodge Н. et al., 1975). Состояние животных, переживших острую интоксикацию, свидетельствует о хорошей переносимости и безвредности препарата в дозах, превышающих максимальные терапевтические в десятки раз.

13

В/в введение экспериментальным животным массированных, заведомо опасных доз препарата (более 1000 мг/кг, что в 100 раз больше максимальной терапевтической) вызывает передозировку и отравление, в патогенезе которого существенную роль играют нарушения центральной нервной системы и угнетение спонтанного дыхания по центральному типу. Нельзя также исключить развитие сердечных аритмий. Лечение передозировки должно быть направлено на восстановление функции дыхания и ускоренное выведение препарата из организма. Проведенные исследования свидетельствуют об отсутствии противопоказаний по показателям острой токсичности для клинических исследований лекарственной формы препарата циклоферон (Саватеева Т.Н., Стройкова Г.С., Колпинская Н.Д., Агапова В.Ф., 1995). Учитывая малую токсичность препарата, показанную в остром эксперименте, рекомендации нормативных документов Фармакологического комитета и правил GLP, а также, исходя из длительности применения препарата у человека (4 недели и более) и величины эффективной терапевтической дозы (10 мг/кг), для оценки подострой токсичности был выбран срок 1 месяц, а хроническое введение осуществляли на протяжении 6 месяцев. В опытах на грызунах (крысы обоего пола) препарат вводился внутримышечно ежедневно на протяжении 180 дней в трех дозах: терапевтической - 10 мг/кг, предполагаемой максимальной - 500 мг/кг (в 50 раз большей терапевтической) и промежуточной - 100 мг/кг. Выбор регистрируемых показателей в каждом случае определялся научной целесообразностью и требованиями нормативных документов. Эксперименты проводились в соответствии с Протоколом исследования. Внутримышечное введение циклоферона. Экспериментальные исследования Внутримышечно лекарственную форму препарата циклоферон различной концентрации (в зависимости от дозы) вводили 1 раз ежедневно в течение 6 месяцев в трех дозах: терапевтической - 10 мг/кг; максимальной 500 мг/кг и промежуточной - 100 мг/кг. Экспериментальная программа (протокол исследования) Животные: крысы самцы, крысы самки. Путь введения: внутрижелудочный. 14

Дозы: 1-я - терапевтическая (10 мг/кг); 2-я - в 10 раз больше терапевтической (100 мг/кг); 3-я - в 100 раз больше терапевтической (500 мг/кг). Частота введения: 1 раз в день в течение 180 дней. Растворитель: подсолнечное масло. Число животных: по 20 в каждой группе. 1-я доза - 20 самцов, 20 самок; 2-я доза 0 - 6 20 самцов, 20 самок; 63-я доза - 20 самцов, 20 самок. Общее количество - 160, из них 40 - контрольная группа. Таблица 1 Регистрируемые показатели Показатели Общее состояние Взвешивание, потребление воды Гематологические, биохимические исследования Физиологические исследования Макроскопическое исследование и взвешивание внутренних органов Гистологические исследования

Животные Все Все

Регистрация Ежедневно 1 раз в неделю

Все

До опыта, через месяц и в конце опыта

Все

До опыта, через месяц и в конце опыта Погибшие - после гибели, остальные - в конце опыта Погибшие - после гибели, остальные - в конце опыта

Все Все погибшие; все контрольные; все, получавшие максимальную дозу

Рандомизацию и содержание животных осуществляли в соответствии с требованиями GLP (РД64-126-91).

Влияние циклоферона на массу тела экспериментальных животных Влияние препарата циклоферон на массу тела белых крыс, потребление корма и воды было изучено в течение 180 дней введения, а затем также через 30 дней после отмены препарата. Отмечено, что вес животных, получавших препарат, равномерно увеличивался на протяжении всего срока исследования как в контрольной, так и в опытных группах. В эти же временные сроки, через 2 часа после введения препарата, учитывали потребление воды и пищи животными. 15

Отмечено, что животные из контрольной и опытных групп потребляли корм одинаково в течение всего времени наблюдения, включая и восстановительный период. Половых различий или различий, связанных с уровнем дозирования, не наблюдалось. Потребление воды несколько возрастало в течение эксперимента. При этом существенной разницы исследуемых показателей в экспериментальных группах, по сравнению с контролем, не отмечалось. Данные измерения ректальной температуры крыс проводили с помощью электрического медицинского термометра ТПЭМ-1 (допустимая основная погрешность от диапазона измеряемых температур ±1%) (табл. 2). Таблица 2 Влияние препарата на температуру тела белых крыс Сроки исПрепарат, мг/кг следоваФиз. раствор 10 100 500 ния (дни) M F M F M F M F Фон 36,2±0,3 36,6±0,2 36,1±0,3 36,3±0,2 35,9±0,4 36,3±0,4 36,4±0,3 36,2±0,2 30-й 35,4±0,5 35,8±0,3 36,7±0,3 35,9±0,7 36,5±0,6 36,5±0,6 36,5±0,4 36,0±0,4 180-й 36,7±0,3 36,4±0,3 36,1±0,5 36,6±0,4 36,7±0,4 36,7±0,4 36,3±0,5 36,4±0,4

Данные измерения ректальной температуры свидетельствуют об отсутствии различий у животных из опытных и контрольной групп. Детоксицирующую функцию печени оценивали по продолжительности гексеналового сна. Эксперимент проводился в теплом и тихом помещении. Животное взвешивали и внутрибрюшинно вводили раствор гексенала в дозе 90 мг\кг, растворитель - 0,9% р-р NaCl. Данные представлены в таблице 3. Таблица 3 Влияние препарата на продолжительность гексеналового сна у белых крыс Сроки исПрепарат, мг/кг следоваКонтроль 10 100 500 ния (дни) M F M F M F M F Фон 48,9±6,7 47,3±7,2 46,2±5,7 60,1±8,0 50,6±8,3 52,6±6,5 39,8±7,4 47,5±6,1 30-й 61,3±7,6 60,8±6,3 58,3±6,4 61,2±7,9 53,6±7,2 60,8±6,3 62,5±8,6 60,6±7,5 180-й 62,7±6,8 75,2±6,3 52,6±7,4 63,6±6,3 59,4±6,5 74,7±7,4 55,9±5,2 61,2±6,4

Установлено, что препарат не изменяет продолжительность гексеналового сна, т.е. не оказывает отрицательного влияния на детоксицирующую функцию печени. Влияние препарата на параметры функционального 16

состояния почек Анализы мочи и оценка функциональной активности почек по секреции фенол-красного проведены в фоне и через 30 и 180 дней после начала введения препарата. Таблица 4 Влияние препарата циклоферона на секреторную функцию почек белых крыс (количество выделенной краски в мг/100 г веса, М±m) Сроки исследоваФиз. раствор ния (дни) M F Фон 0,090± 0,090± 0,005 0,004 30-й 0,082± 0,095± 0,006 0,005 180-й 0,100± 0,110± 0,004 0,010

10 M 0,095± 0,010 0,090± 0,006 0,100± 0,010

Препарат, мг/кг 100 F M F 0,090± 0,100± 0,090± 0,006 0,005 0,006 0,098± 0,095± 0,087± 0,002 0,005 0,003 0,090± 0,120± 0,080± 0,005 0,010 0,006

500 M 0,090± 0,008 0,091± 0,005 0,110± 0,008

F 0,095±0, 006 0,092± 0,005 0,100± 0,006

В ходе проведения эксперимента отмечено, что существенных изменений со стороны выделительной функции почек при введении препарата циклоферон белым крысам не наблюдалось. Отмеченное у самок опытных групп некоторое возрастание диуреза (при тестировании через 180 дней) в восстановительный период нормализовалось. Изучение влияния циклоферона на показатели периферической крови и характер миелограммы Биохимические и гематологические исследования проводились у фоновой группы до начала введения препарата, затем через 30 и 180 дней после ежедневного введения. Кровь получали после одномоментного гильотинирования с последующим извлечением бедренной кости для исследования миелограммы. При микроскопировании мазков лимфоциты имеют сильно пикнотическое ядро, иногда обнаруживается значительная азурофильная зернистость. Основная масса сегментоядерных клеток имеет нежную, нейтрофильную, не вполне ясно выраженную зернистость в мазках. Ядра эозинофильных клеток образованы из рыхлого хроматинового вещества и имеют почти круглую форму. Ядра эозинофилов и нейтрофилов образуются по кольчатому типу, поэтому нередко встречаются кольцеобразные ядра у палочковидных форм. Моноциты сильно отличаются от лимфоцитов. Последние равны по величине двум эритроцитам, имеют большое бобовидное ядро и широкую протоплазматическую кайму, которая окрашива17

ется в синий или фиолетовый цвет с нежной грануляцией. Кровяные пластинки лежат большими кучками. Следует отметить, что на 30 и 180 сутки исследования происходило умеренное, но статистически значимое увеличение количества гемоглобина, абсолютного количества эритроцитов, абсолютное и относительное увеличение количества лимфоцитов и тромбоцитов периферической крови. Показатели коагулограммы за весь период наблюдения у подопытных животных достоверно не отличались от таковых в фоновой и контрольной группах. Патологических сдвигов не выявлено. Следовательно, длительное применение препарата циклоферон стимулирует лимфоцитарный и мегакариоцитарный ростки кроветворения. При микроскопировании органы кроветворения крыс содержат круглоядерные клетки, нейтрофильные и эозинофильные миелоциты, полинуклеарные нейтрофилы и эозинофилы, нормобласты и гигантские клетки. Основная масса клеток костного мозга состоит из круглоядерных клеток, полинуклеаров и переходных форм с большей или меньшей перешнуровкой ядра. Одноядерные клетки достаточно разнообразны, ядра их мелкие, расположены центрально или эксцентрично, в ряде случаев полностью заполняют клетку. Полинуклеарные формы чаще нейтрофильны и реже эозинофильны. Нейтрофильная грануляция нежна и не очень обильна. Эозинофильная грануляция хорошо выражена. Базофилы имеют круглое или лопастное ядро. Гигантские клетки с гомогенной плазмой и многочисленными мелкими центрально лежащими ядрами попадаются редко. Нормобласты имеют типичные ядра и протоплазму. Результаты исследования свидетельствуют о том, что в костном мозге крыс, получавших препарат, происходило умеренное, но статистически достоверное увеличение общего количества клеток, а также клеток эритроцитарного ростка, лимфоцитов и мегакариоцитов по сравнению с таковыми показателями интактных животных. Патологических сдвигов костномозгового кроветворения не отмечалось. При изучении биохимического гомеостаза экспериментальных животных отмечено, что и у самцов и у самок опытных групп не выявлено достоверно значимых результатов показателей биохимического гомеостаза по сравнению с фоном и контролем. Влияние препарата циклоферон на двигательную активность животных В таблице 5 представлены данные по влиянию препарата на спонтанную двигательную активность крыс (СДА). Крысы по одной помещались в регистрационную камеру автоматического регистратора Coulburn

18

Insteuments, где за каждые 5 минут на протяжении 35 минут у них регистрировалось количество движений. Таблица 5 Влияние препарата циклоферона на СДА белых крыс Время наблюдения, мин

День регистрации Фон

Самцы 30

0-5 6-10 11-15 16-20 21-25 26-30 31-35 0-35

50,0±18,8 45,4±29,1 45,2±21,2 22,8±5,1 30,4±12,0 32,0±14,1 18,0±14,1 243,8±66,1

28,4±8,3 37,0±17,3 49,4±16,5 31,6±15,6 3,8±2,4* 14,2±9,4 16,8±13,9 181,2±64,2

0-5 6-10 11-15 16-20 21-25 26-30 31-35 0-35

83,0±29,1 36,6±16,9 25,4±12,0 30,8±16,9 22,8±12,1 16,0±6,8 25,6±9,0 226,2±62,3

63,0±26,8 47,2±23,1 37,2±17,1 22,6±5,1 27,8±13,7 13,6±9,6 22,4±5,4 233,8±81,1

0-5 6-10 11-15 16-20 21-25 26-30 31-35 0-35

85,0±41,9 65,8±19,0 70,8±25,7 95,0±29,9 21,6±12,0 56,0±26,1 30,4±16,1 14,2±7,1 12,6±6,8 34,0±17,5 22,4±11,1 26,4±9,8 17,6±7,5 28,0±13,0 260,4±105,7 319,0±84,9

0-5 6-10 11-15 16-20 21-25 26-30 31-35 0-35

78,4±33,2 82,3±22,7 52,4±32,6 78,3±25,7 35,2±24,2 66,3±16,1 25,8±18,5 35,3±23,3 22,1±13,8 19,3±7,3 22,4±11,1 18,4±9,8 19,8±8,53 22,1±8,7 256,1±102,4 322,0±63,4

180 Контроль 14,8±7,6 24,5±22,4 9,8±2,8 10,3±10,6 1,5±1,7* 3,0±3,4* 0,8±0,8 64,5±25,8* 10 мг/кг 21,5±2,2* 25,8±12,9 29,3±15,4 30,8±23,2 36,8±20,4 25,5±23,5 14,5±11,2 184,0±72,2 100 мг/кг 50,8±15,0 27,6±12,0 41,6±17,1 38,6±7,5 14,6±11,6 20,0±17,8 6,0±5,6 199,2±67,0 500 мг/кг 85,7±25,6 82,6±22,0 44,2±20,5 25,1±13,6 17,5±8,3 15,6±7,4 16,2±9,2 286,9±63,4

Фон

Самки 30

180

92,2±20,1 74,4±12,0 45,2±18,8 25,4±15,4 5,8±2,6 11,2±9,2 5,2±2,6 260,4±42,2

39,6±13,7 28,4±5,8* 21,0±11,6 21,0±15,1 17,4±4,9 2,6 ±1,3 6,0±3,4 136,0±38,5

29,6±9,7* 20,2±6,8* 15,2±6,0 15,4±9,4 3,2±1,9 3,6±3,0 5,8±3,4 93,0±31,0*

64,0±16,7 23,2±8,9 42,4±12,6 43,8±14,3 20,6±8,8 38,0±13,7 41,6±13,7 13,0±5,1 14,2±8,6 22,4±7,5 22,2±9,6 18,6±12,2 27,0±15,2 5,8± 2,8 22,6±18,4 26,6±7,3 15,0±9,2 21,4±14,1 9,2±6,0 12,8±7,5 7,6±3,0 234,6±40,5 112,6±12,8* 160,8±62,1 107,2±23,8 98,2±35,5 71,0±10,7 57,8±12,4 17,0±8,6 24,0±12,0 21,2±13,7 396,4±44,7

44,0±28,2 42,8±16,5 71,2±16,7 47,2±24,8 84,4±16,8 35,8±26,8 28,5±13,5 40,0±27,6 37,0±11,9 41,0±17,8 12,4±4,4 24,4±18,4 36,4±15,5 17,8±8,3 314,0±90,9 159,4±105,3

56,3±18,2 63,4±25,4 53,5±19,4 42,7±16,3 23,4±7,2 25,0±13,3 17,5±7,4 281,8±54,7

34,2±18,3 51,4±23,0 64,8±31,3 38,0±14,3 27,1±8,3 23,5±9,2 21,0±10,2 260,0±74,3

53,7±24,1 44,7±18,5 38,9±19,3 40,7±20,7 24,6±11,3 17,4±8,1 20,6±8,3 240,6±94,8 19

Как видно из таблицы 5, у самцов при введении 10 мг/кг препарата отмечена более высокая СДА через 30 и 180 дней после начала введения по сравнению с животными контрольной группы. При введении 100 мг/кг препарата СДА крыс была также выше, чем у контрольных животных. У самок наблюдалась более высокая СДА по сравнению с контрольными животными при введении 10 мг/кг препарата через 180 дней и через 30 дней при введении 100 мг/кг. Однако выявленная тенденция к увеличению СДА ни в одном случае не была статистически значимой. Изучение влияния препарата циклоферон на структуру поведения крыс в "открытом поле" выявило, что достоверных изменений в структуре поведения животных всех экспериментальных групп не наблюдалось. Отмечалось характерное для животных, вторично помещаемых в ситуацию "открытого поля", изменение поведенческого рисунка, в основном за счет удлинения латентного периода, носившего недостоверный характер. Влияние препарата на суммационно-подпороговый показатель и сердечно-сосудистую деятельность Данные по влиянию препарата циклоферон на суммацию подпороговых импульсов представлены в таблице 6. Таблица 6 Влияние препарата на порог возбудимости белых крыс Препарат, мг/кг Физ. раствор 10 100 500

Пол M F M F M F M F

Фон 11,5±1,1 7,9±1,1 10,0±1,1 9,0±0,5 9,2±0,8 9,1±0,5 9,8±1,0 9,6±0,8

День наблюдения 30-й 10,3±0,9 9,7±1,0 9,5±0,9 9,2±0,6 9,1±0,5 9,1±0,6 9,2±0,6 9,0±0,5

180-й 12,1±0,7 7,7±1,3 12,0±1,6 10,1±2,6 11,9±1,6 8,5±0,8 10,6±1,6 10,2±1,0

Из таблицы видно, что введение препарата в течение 180 дней ни в одной из исследованных доз не влияло на порог возбудимости животных. Данные по влиянию на систолическое артериальное давление представлены в таблице 7. 20

Таблица 7 Влияние препарата на систолическое артериальное давление (мм рт. ст.) Препарат, мг/кг

Пол

Фон 112,0±12,9 127,0±8,6 112,0±4,3 119,0±6,5 134,0±17,2 149,0±3,2 126,0±17,2 137,0±3,2

M F M F M F M F

Физ. раствор 10 100 500

День наблюдения 30-й 102,0±6,5 100,0±6,5* 102,0±6,5 96,0±2,2* 102,0±4,3 106,0±10,8* 111,0±6,4 112,0±10,8*

180-й 104,0±8,0 92,0±6,3* 113,0±8,4 95,0±7,4* 104,0±6,3 102,0±4,2* 118,0±7,6 105,0±6,4*

* достоверные отличия от контроля (р